如果正确使用细胞培养级鼠尾胶原蛋白 I型
更新时间：2020-10-16 点击次数：717次如果正确使用细胞培养级鼠尾胶原蛋白 I型
上海信帆生物供应细胞培养级鼠尾胶原蛋白 I型，产品现货供应，质量稳定！
鼠尾胶原蛋白 I型(rat tail tendon collagen type I)说明书
产品说明
鼠尾胶原蛋白 I型(rat tail tendon collagen type I),5mg/ml, 溶解于 0.006mol/L 乙酸, 无菌。
4度保存，切勿冻存，有效期一年。
本公司生物试剂的鼠尾胶原蛋白 I型(rat tail tendon collagen type I)是通过 Birkedal-Hansen1 的方法，通过醋酸抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备的。
鼠尾胶原蛋白可用于包被细胞培养器皿，培养一些在普通细胞培养器皿中不易贴壁的细胞。也可用于制备三维胶，模拟真实的生长环境，使细胞在三维环境中生长。
使用方法
1、细胞培养器皿的表面包被 浓度： 1-5ug/cm2
以包被浓度为 2 ug/cm2 为例：
用无菌0.006mol/L(0.36g/L) 乙酸将胶原蛋白稀释到0.012mg/ml。按表 (一)体积加到相应的培养器皿中：
表面积(cm2 ,每孔或每皿) | 加入 0.012mg/ml 胶原的体积 ( ul ) | |
96孔细胞培养板 | 0.3 | 50 |
24孔细胞培养板 | 1.9 | 300 |
12孔细胞培养板 | 3.8 | 600 |
6孔细胞培养板 | 9.5 | 1580 |
35mm细胞培养皿 | 8 | 1330 |
60mm细胞培养皿 | 21 | 3500 |
100mm细胞培养皿 | 55 | 9170 |
确保胶原蛋白溶液铺满器皿的表面，开盖在超净台上过夜晾干。 也可以在室温放置 1小时后，用PBS洗3-4次后直接使用。
包被好的器皿在 4-25℃至少可保存3个月以上的时间。
2、三维胶原的制备
鼠尾胶原蛋白I型在浓度1mg/ml以上，pH 7左右时可形成具有一定强度三维胶,建议成胶浓度1-2mg/ml。胶原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中，在成胶过程中需要加入0.06X 体积的 0.1mol/L NaOH 来中和。
需要的溶液 ( 均需要 无菌 、 预冷 ): 10xPBS( 可含10 mg/L的酚红用于 pH 指示 )或 10x 培养液 , 0.1mol/L NaOH, 0.1mol/L 乙酸(一般不用), 双蒸水
A．不含细胞的三维胶原的制备（以配制1毫升，1mg/ml三维胶为例）：将200ul 鼠尾胶原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的离心管中，加入 690ul H2O。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反过来把12ul 0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。再加入100ul 10xPBS或10x培养液，混匀后立即加到培养器皿中(混匀后pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测试)。将培养器皿在室温(25度左右)下放置20分钟待胶凝固后，转移到培养箱内。如果配制中使用的是10xPBS，使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。
B．含细胞的三维胶原的制备（以配制1毫升，1mg/ml三维胶为例）：准备好悬浮于培养液的细胞，并放置于冰浴中。将200ul 鼠尾胶原蛋白I型 (5mg/ml)加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反过来把12ul 0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。再加入23ul 10xPBS或10x培养液，混匀(混匀后pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测试)。加入760ul的细胞悬浮液，混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温下放置20分钟待胶凝固后，加入适当体积的细胞培养液，转移到培养箱中培养。
注：鼠尾胶原蛋白I型在室温下pH中性时可迅速成胶，在操作过程中要尽量保持低温。
本产品于实验室研究用。
如果正确使用细胞培养级鼠尾胶原蛋白 I型
