海藻糖酶测定试剂盒 生化试剂

海藻糖酶测定试剂盒

（Trehalase，THL; 分光光度法 50T/24 样）

一、测定意义：

THL广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。

海藻糖酶主要功能在于生物体分解海藻糖生成葡萄糖而

直接用于能量供应。

二、测定原理：

THL 催化海藻糖产生葡萄糖，经葡萄糖氧化酶作用

生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化物酶催化过氧化氢跟

4-氨基安-替比林偶联酚反应生成显色物，在 505nm 处测

定其吸光度值，反映 THL 的酶活性。

三、需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃

比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

四、试剂的组成和配制：

提取液：液体25mL×1瓶，4°C保存；

试剂一：液体10mL×1瓶，4°C保存；

试剂二：液体25mL×1瓶，4°C保存；

试剂三：液体25mL×1瓶，4°C保存。如果出现结冰现象可

以37温浴溶解后使用。

工作液：试剂二和试剂三等比例混合，需要多少配多少，

现配现用。

五、测定步骤：

1、样本前处理：

（1）细菌或细胞样本：

收集细菌或细胞到离心管中，离心后弃上清；按照

细菌或细胞数量（万）和提取液体积（mL）500-1000:1

的比例（建议 500 万中加入 1mL 提取液），超声破碎（冰

浴，功率 20%或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）

后，8000g，4°C 下离心 10min，取上清放置在冰上待测。

（2）组织样本：

按照组织质量（g）和提取液体积（mL）1:5-10 的比

例（建议称取 0.1g 组织加入 1mL 提取液），冰浴中匀浆。

8000g，4°C 离心 10min 后取上清放置在冰上待测。

（3）血清（浆）样本：

按照血清（浆）和提取液比例 1:5-10 的比例（建议

0.1mL 血清加入 1mL 提取液），冰浴中匀浆后 8000g，4°C

离心 10min 取上清放置在冰上待测。

海藻糖酶测定试剂盒