海藻糖酶测定试剂盒 生化试剂
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海藻糖酶测定试剂盒,THL广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。海藻糖酶主要功能在于生物体分解海藻糖生成葡萄糖而直接用于能量供应。
海藻糖酶测定试剂盒
(Trehalase,THL; 分光光度法 50T/24 样)
一、测定意义:
THL广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。
海藻糖酶主要功能在于生物体分解海藻糖生成葡萄糖而
直接用于能量供应。
二、测定原理:
THL 催化海藻糖产生葡萄糖,经葡萄糖氧化酶作用
生成葡萄糖酸和过氧化氢,过氧化物酶催化过氧化氢跟
4-氨基安-替比林偶联酚反应生成显色物,在 505nm 处测
定其吸光度值,反映 THL 的酶活性。
三、需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃
比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
四、试剂的组成和配制:
提取液:液体25mL×1瓶,4°C保存;
试剂一:液体10mL×1瓶,4°C保存;
试剂二:液体25mL×1瓶,4°C保存;
试剂三:液体25mL×1瓶,4°C保存。如果出现结冰现象可
以37温浴溶解后使用。
工作液:试剂二和试剂三等比例混合,需要多少配多少,
现配现用。
五、测定步骤:
1、样本前处理:
(1)细菌或细胞样本:
收集细菌或细胞到离心管中,离心后弃上清;按照
细菌或细胞数量(万)和提取液体积(mL)500-1000:1
的比例(建议 500 万中加入 1mL 提取液),超声破碎(冰
浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次)
后,8000g,4°C 下离心 10min,取上清放置在冰上待测。
(2)组织样本:
按照组织质量(g)和提取液体积(mL)1:5-10 的比
例(建议称取 0.1g 组织加入 1mL 提取液),冰浴中匀浆。
8000g,4°C 离心 10min 后取上清放置在冰上待测。
(3)血清(浆)样本:
按照血清(浆)和提取液比例 1:5-10 的比例(建议
0.1mL 血清加入 1mL 提取液),冰浴中匀浆后 8000g,4°C
离心 10min 取上清放置在冰上待测。
海藻糖酶测定试剂盒