微量还原型谷-胱甘肽(GSH)测定试剂盒 生化试剂
- 型 号:
- 参考价:0~0
微量还原型谷-胱甘肽(GSH)测定试剂盒,将收集好的细胞,用 PBS 清洗 1~2 次后,低速离心收集沉淀细胞,再加入 0.3~0.5mL (0.1M, PH 7.4)的等渗 PBS 缓冲液悬浮细胞,超声或手动研磨破碎细胞后待测。
微量还原型谷-胱甘肽(GSH)测定试剂盒
(微板法)
一、试剂组成与配制(96T):
试剂一:沉淀剂, 20mL×1 瓶,室温保存 6 个月。此为过饱和溶液,如有结晶,则取上清进行实验。
试剂二:缓冲液, 20mL×1 瓶,2~8℃保存 6 个月。
试剂三:显色剂, 5mL×1 瓶,2~8℃避光保存 6 个月。
试剂四:GSH 标准品(标准品粉剂,3.07mg×3 支;标准品溶剂贮备液,10mL×1 瓶),2~8℃保 存 6 个月。
GSH 标准品溶剂应用液配制:临用前将标准品溶剂贮备液:双蒸水=1:9 稀释,按所需量现用现配。
1mmol/LGSH 标准品溶液配制:GSH 的分子量为 307,每次测定前将 3.07mg 的 GSH 标准品加到 10mLGSH 的溶剂应用液中,混匀,2℃~8℃可保存一周。
20μmol/LGSH 标准品溶液配制:取 1mmol/LGSH 标准溶液 0.2mL 加 GSH 标准溶剂应用液 9.8mL。
二、样本前处理
1、培养细胞:将收集好的细胞,用 PBS 清洗 1~2 次后,低速离心收集沉淀细胞,再加入 0.3~0.5mL (0.1M, PH 7.4)的等渗 PBS 缓冲液悬浮细胞,超声或手动研磨破碎细胞后待测。
上清液制备:取破碎后的细胞悬液 0.1mL,加 0.1mL 试剂一混匀,3500 转/分,离心 10 分钟,
取上清液待测。
2、组织样本:
10%匀浆液的制备:准确称取组织重量,按重量(g):体积(mL)=1:9 的比例,加入 9 倍的生 理盐水制成组织匀浆,2500 转/分,离心 10 分钟,取上清液待测。
上清液制备:取 10%组织匀浆 0.1mL,加 0.1mL 试剂一混匀,3500 转/分,离心 10 分钟,取上 清液待测。
3 、血清(浆)样本 :
取血清(浆)0.05mL,加试剂一 0.2mL 混匀,3500 转/分,离心 10 分钟,取上清液待测。
4、全血样本:
10 倍溶血液的制备:取 0.1mL 肝素抗凝全血加双蒸水 0.9mL,充分混匀,直至透亮为止。
上清液制备:取 10 倍溶血液 0.05mL,加 0.2mL 试剂一混匀,3500 转/分,离心 10 分钟,取上 清液待测。
五、标准曲线:(试剂盒灵敏度为 1.5μmol/L)
取一定量的 1mmol/L GSH 标准品用溶剂应用液配制成不同浓度的 GSH 标准制作标准曲线:
100μmol/L、50μmol/L、20μmol/L、10μmol/L、5μmol/L、0μmol/L。
六、测定原理:
还原型谷-胱甘肽(GSH)可与二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)反应,生成一种黄色化合物,可
在 405nm 下进行比色定量测定还原型谷-胱甘肽(GSH)含量。
七、检测意义:
还原型谷-胱甘肽(GSH)是机体内最重要的非酶性抗氧化物,具有清除自由基、解毒、促进
铁质吸收及维持红细胞膜的完整性、维持脱氧核糖核酸的生物合成、细胞的正常生长发育及细胞
免疫等多种重要生理功能。谷-胱甘肽是谷-氨酸、甘-氨酸和半胱-氨酸组成的一种三肽,是组织中主
要的非蛋白质的巯基化合物,并且是 GSH-PX 和 GSH-ST 两种酶类的底物,为这二种酶分解氢过 氧化物所必需,并能稳定含巯基的酶和防止血红蛋白及其它辅因子受氧化损伤。GSH 是一种低分 子清除剂,可清除 O2 -、H2O2、LOOH,因而 GSH 量的多少是衡量机体抗氧化能力的重要因素。
微量还原型谷-胱甘肽(GSH)测定试剂盒