微量还原型谷-胱甘肽(GSH)测定试剂盒 生化试剂

微量还原型谷-胱甘肽(GSH)测定试剂盒

（微板法）

一、试剂组成与配制（96T）：

试剂一：沉淀剂， 20mL×1 瓶，室温保存 6 个月。此为过饱和溶液，如有结晶，则取上清进行实验。

试剂二：缓冲液， 20mL×1 瓶，2～8℃保存 6 个月。

试剂三：显色剂， 5mL×1 瓶，2～8℃避光保存 6 个月。

试剂四：GSH 标准品（标准品粉剂，3.07mg×3 支；标准品溶剂贮备液，10mL×1 瓶），2～8℃保 存 6 个月。

GSH 标准品溶剂应用液配制：临用前将标准品溶剂贮备液：双蒸水=1：9 稀释，按所需量现用现配。

1mmol/LGSH 标准品溶液配制：GSH 的分子量为 307，每次测定前将 3.07mg 的 GSH 标准品加到 10mLGSH 的溶剂应用液中，混匀，2℃～8℃可保存一周。

20μmol/LGSH 标准品溶液配制：取 1mmol/LGSH 标准溶液 0.2mL 加 GSH 标准溶剂应用液 9.8mL。

二、样本前处理

1、培养细胞：将收集好的细胞，用 PBS 清洗 1～2 次后，低速离心收集沉淀细胞，再加入 0.3～0.5mL （0.1M， PH 7.4）的等渗 PBS 缓冲液悬浮细胞，超声或手动研磨破碎细胞后待测。

上清液制备：取破碎后的细胞悬液 0.1mL，加 0.1mL 试剂一混匀，3500 转/分，离心 10 分钟，

取上清液待测。

2、组织样本：

10%匀浆液的制备：准确称取组织重量，按重量（g）：体积（mL）=1:9 的比例，加入 9 倍的生 理盐水制成组织匀浆，2500 转/分，离心 10 分钟，取上清液待测。

上清液制备：取 10%组织匀浆 0.1mL，加 0.1mL 试剂一混匀，3500 转/分，离心 10 分钟，取上 清液待测。

3 、血清（浆）样本 ：

取血清（浆）0.05mL，加试剂一 0.2mL 混匀，3500 转/分，离心 10 分钟，取上清液待测。

4、全血样本：

10 倍溶血液的制备：取 0.1mL 肝素抗凝全血加双蒸水 0.9mL，充分混匀，直至透亮为止。

上清液制备：取 10 倍溶血液 0.05mL，加 0.2mL 试剂一混匀，3500 转/分，离心 10 分钟，取上 清液待测。

五、标准曲线：（试剂盒灵敏度为 1.5μmol/L）

取一定量的 1mmol/L GSH 标准品用溶剂应用液配制成不同浓度的 GSH 标准制作标准曲线：

100μmol/L、50μmol/L、20μmol/L、10μmol/L、5μmol/L、0μmol/L。

六、测定原理：

还原型谷-胱甘肽（GSH）可与二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成一种黄色化合物，可

在 405nm 下进行比色定量测定还原型谷-胱甘肽（GSH）含量。

七、检测意义：

还原型谷-胱甘肽（GSH）是机体内最重要的非酶性抗氧化物，具有清除自由基、解毒、促进

铁质吸收及维持红细胞膜的完整性、维持脱氧核糖核酸的生物合成、细胞的正常生长发育及细胞

免疫等多种重要生理功能。谷-胱甘肽是谷-氨酸、甘-氨酸和半胱-氨酸组成的一种三肽，是组织中主

要的非蛋白质的巯基化合物，并且是 GSH-PX 和 GSH-ST 两种酶类的底物，为这二种酶分解氢过 氧化物所必需，并能稳定含巯基的酶和防止血红蛋白及其它辅因子受氧化损伤。GSH 是一种低分 子清除剂，可清除 O2 -、H2O2、LOOH，因而 GSH 量的多少是衡量机体抗氧化能力的重要因素。

微量还原型谷-胱甘肽(GSH)测定试剂盒