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微量还原型谷-胱甘肽(GSH)测定试剂盒 生化试剂

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微量还原型谷-胱甘肽(GSH)测定试剂盒,将收集好的细胞,用 PBS 清洗 1~2 次后,低速离心收集沉淀细胞,再加入 0.3~0.5mL (0.1M, PH 7.4)的等渗 PBS 缓冲液悬浮细胞,超声或手动研磨破碎细胞后待测。

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微量还原型谷-胱甘肽(GSH)测定试剂盒

(微板法)

一、试剂组成与配制(96T):

试剂一:沉淀剂, 20mL×1 瓶,室温保存 6 个月。此为过饱和溶液,如有结晶,则取上清进行实验。

试剂二:缓冲液, 20mL×1 瓶,28℃保存 6 个月。

试剂三:显色剂, 5mL×1 瓶,28℃避光保存 6 个月。

试剂四:GSH 标准品(标准品粉剂,3.07mg×3 支;标准品溶剂贮备液,10mL×1 瓶),28℃保 存 6 个月。

GSH 标准品溶剂应用液配制:临用前将标准品溶剂贮备液:双蒸水=19 稀释,按所需量现用现配。

1mmol/LGSH 标准品溶液配制:GSH 的分子量为 307,每次测定前将 3.07mg GSH 标准品加到 10mLGSH 的溶剂应用液中,混匀,2℃~8℃可保存一周。

20μmol/LGSH 标准品溶液配制: 1mmol/LGSH 标准溶液 0.2mL GSH 标准溶剂应用液 9.8mL

二、样本前处理

1、培养细胞:将收集好的细胞,用 PBS 清洗 12 次后,低速离心收集沉淀细胞,再加入 0.30.5mL 0.1M PH 7.4)的等渗 PBS 缓冲液悬浮细胞,超声或手动研磨破碎细胞后待测。

上清液制备:取破碎后的细胞悬液 0.1mL,加 0.1mL 试剂一混匀,3500 /分,离心 10 分钟,

取上清液待测。

2、组织样本:

10%匀浆液的制备:准确称取组织重量,按重量(g):体积(mL=1:9 的比例,加入 9 倍的生 理盐水制成组织匀浆,2500 /分,离心 10 分钟,取上清液待测。

上清液制备: 10%组织匀浆 0.1mL,加 0.1mL 试剂一混匀,3500 /分,离心 10 分钟,取上 清液待测。

3 、血清(浆)样本

取血清(浆)0.05mL,加试剂一 0.2mL 混匀,3500 /分,离心 10 分钟,取上清液待测。

4、全血样本:

10 倍溶血液的制备: 0.1mL 肝素抗凝全血加双蒸水 0.9mL,充分混匀,直至透亮为止。

上清液制备: 10 倍溶血液 0.05mL,加 0.2mL 试剂一混匀,3500 /分,离心 10 分钟,取上 清液待测。

五、标准曲线:(试剂盒灵敏度为 1.5μmol/L

取一定量的 1mmol/L GSH 标准品用溶剂应用液配制成不同浓度的 GSH 标准制作标准曲线:

100μmol/L50μmol/L20μmol/L10μmol/L5μmol/L0μmol/L

六、测定原理:

还原型谷-胱甘肽(GSH)可与二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)反应,生成一种黄色化合物,可

405nm 下进行比色定量测定还原型谷-胱甘肽(GSH)含量。

七、检测意义:

还原型谷-胱甘肽(GSH)是机体内最重要的非酶性抗氧化物,具有清除自由基、解毒、促进

铁质吸收及维持红细胞膜的完整性、维持脱氧核糖核酸的生物合成、细胞的正常生长发育及细胞

免疫等多种重要生理功能。谷-胱甘肽是谷-氨酸、甘-氨酸和半胱-氨酸组成的一种三肽,是组织中主

要的非蛋白质的巯基化合物,并且是 GSH-PX GSH-ST 两种酶类的底物,为这二种酶分解氢过 氧化物所必需,并能稳定含巯基的酶和防止血红蛋白及其它辅因子受氧化损伤。GSH 是一种低分 子清除剂,可清除 O2 -H2O2LOOH,因而 GSH 量的多少是衡量机体抗氧化能力的重要因素。

微量还原型谷-胱甘肽(GSH)测定试剂盒 

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