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2018-04-10过氧化氢酶(CAT)测定试剂盒(动物组织)
(紫外法)
一、测定意义:
氢氧自由基(OH·)是化学性质最活泼的活性氧,它
几乎与细胞内的每一类有机物如糖、氨基酸、磷脂、核苷
酸和有机酸等都能反应,并且有非常高的速度常数,因此
它具有破坏性,但它可以被过氧化氢酶分解,因而测定
过氧化氢酶的高低就有其重要意义。
二、测定原理:
红细胞或组织中过氧化氢酶(Catalase)在一定条件下
能直接分解其底物过氧化氢(H2O2),使 H2O2 在反应液
中的浓度逐渐降低,相应的吸光度也逐渐下降。
三、试剂组成与配制(100 管/96 样):
试剂一:30mL 水剂贮备液×1 瓶,4℃可保存 6 个月。
试剂二:甲粉×1 瓶,乙粉×1 瓶,4℃可保存 6 个月。用时
各加双蒸水 200mL,溶解后混合一起,再用
双蒸水定容至 500mL,配成试剂二应用液,4℃保
存 3 个月。
五﹑操作步骤:
1﹑样本前处理:
①﹑溶血液的制备:
取老鼠的新鲜血液 50μL 加双蒸水至 2.5mL
混匀配成 1:49 溶血液。
②﹑1%肝组织匀浆的制备:
按《实验方法学》制备 10%肝组织匀浆,再
取部分 10%肝组织匀浆,用生理盐水按
1︰
9 稀释制备成 1%肝组织匀浆。
注:如果样本(脑组织、神经组织等)的 CAT 活力太低,
可以加大样本浓度或增加取样量。
2﹑测定过程:
取 1cm 光径石英比色皿,紫外 240nm,双蒸水调零
备用。取经过前处理的样本 0.02mL 加入比色皿底部,
将已预温至25℃,OD在0.5~0.55 之间的底物溶液3mL
直接用 5mL 或 10mL 的大移液器快速冲入比色皿中,
240nm 处立即测定吸光度,记下 A1值,比色皿不要取
出,1 分钟时立即再测一次吸光度,记下 A2 值。(没
有大移液器可用滴管或细玻棒快速混匀 1~2 次)
七、注意点:
1、为了减少误差,两只石英比色杯要进行校正。
2、每次加样前比色杯要用双蒸水冲洗 2~3 次,扣干备用。
3、每次比色前(加样前)比色杯的透光面要用擦镜纸擦干
净。
4、比色与计时要同步,为二个人或者用自动生化分析
仪。
5、加样品量不可太大,以免产生气泡影响吸光度。
6、1:100 的溶血液放置室温下不可超过 2 小时。
7、脑组织和神经组织中过氧化氢酶活力非常低。
过氧化氢酶(CAT)测定试剂盒(动物组织)