过氧化氢酶（CAT）测定试剂盒

过氧化氢酶（CAT）测定试剂盒

（钼酸铵法）

一、测定原理：

过氧化氢酶（Catalase）分解 H2O2 的反应可通过加入

钼酸铵而迅速中止，剩余的 H2O2与钼酸铵作用产生一种淡

黄色的络合物，在 405nm 处测定其变化量，可计算出 CAT

的活力。

二、试剂组成与配制：(100 管/96 样)

试剂一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存 6 个月。

试剂二：底物液体 10mL×1 瓶，4℃保存 6 个月。

试剂三：显色粉剂×1 瓶，4℃保存 6 个月。加双蒸水 100mL

溶解，4℃保存 1 个月。（如果底部有不溶粉末沉

淀，直接取上清使用，不影响测定结果）

试剂四：液体 10mL×1 瓶，4℃保存 6 个月。天冷时会凝固，

临用前 37℃加热至透明方可使用。

（二）、组织样本的检测：

1、组织匀浆液的制备：准确称取组织重量，按重量（g）:体

积（mL）=1:9 的比例加入 9 倍体积的生理盐水，冰水浴条件

下，制备成 10%的组织匀浆，2500 转/分离心 10 分钟，取上

清，再用生理盐水稀释成最佳取样浓度，待测（最佳取样浓

度摸索见附录）。

注：一般情况下样本没有高脂（浑浊、不透明）、颜色

等导致显著差异情况，对照管的样本可随机取样，做 1～

2 管对照即可。如需做样本自身对照，则试剂盒所测定

样本数量减至 48 样。

3、组织中 CAT 活力的计算：

（1）、定义：每毫克组织蛋白每秒钟分解 1µmol 的 H2O2

为一个活力单位。

注：271 为斜率的倒数，常数，直接使用;V 样：取样量，

0.05mL；T：反应时间，60 秒；Cpr：匀浆液蛋白浓

度，mgprot/mL（prot 指蛋白）。

（三）、全血的检测：

1、1﹕99 溶血液的制备：取 50µL 全血加双蒸水至 5mL 充

分混匀后放置 10 分钟，待测。

注：全血样本测定时必须每个样本都要做自身对照管，空白

对照管只需做 1 管。

3、血红蛋白中 CAT 活力的计算：

（1）、定义：每毫克血红蛋白每秒钟分解 1µmol 的 H2O2

为一个活力单位。

四、注意事项：

1、本试剂盒也可用酶标仪读数（即在反应完后取 200μL 反

应液加入孔板（注意避免气泡产生），405nm 处读数，

计算公式斜率倒数变为 235.65 代入计算）；

2、植物样本在测定时，一般不需要稀释来摸索最佳浓度（因

为植物中 CAT 活力较低），可直接取样测定（或加大样本

量测定），计算时也可不测蛋白浓度，改用质量浓度（植

物质量（g）/提取液总体积（mL））代替蛋白浓度代入计

算即可；

3、测定时，加入试剂二的同时需要计时，反应到 60 秒时

必须加入试剂三以终止反应；

4、细胞样本做法也可参照组织样本，前处理可参考本公

司“技术支持"中“技术文章"。

附录Ⅰ:最佳取样浓度摸索

一、样本来源：正常小鼠肝组织

二、前处理：

10%匀浆液的制备：准确称取组织重量，按重量（g）

:

体积（mL）=1:9 的比例，加入 9 倍体积的生理盐水，冰

水浴条件下机械匀浆，制成 10%的组织匀浆，2500 转/

分，离心 10 分钟，取上清液待测；10%的匀浆液再用生

理盐水稀释成不同的浓度： 5%、2%、1%、0.5%、0.25%、

0.125%

 过氧化氢酶（CAT）测定试剂盒