人β干扰素（IFN-β）ELISA试剂盒

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人β干扰素(IFN-β)ELISA试剂盒

 干扰素不能直接灭活病毒，而是通过诱导细胞合成抗病毒蛋白（AVP）发挥效应。干扰素首先作用于细胞的干扰素受体，经信号转导等一系列生休过程，激活细胞基因表达多种抗病毒蛋白，实现对病毒的抑制作用。抗病毒蛋白主要包括2′-5′A合成酶和蛋白激酶等。前者降解病毒mRNA、后者抑制病毒多肽链的合成，使病毒复制终止。干扰素的作用特点：①间接性：通过诱导细胞产生抗病毒蛋白等效应分子抑制病毒。②广谱性：抗病毒蛋白是一类酶类，作用无特异性。对多数病毒均有一定抑制作用。③种属特异性：一般在同种细胞中活性高，对异种细胞无活性。④发挥作用迅速：干扰素既能中断受染细胞的病毒感染又能限制病毒扩散。在感染的起始阶段，体液免疫和细胞免疫发生作用之前，干扰素发挥重要作用。

β干扰素是一种重要的I型干扰素,主要是由成纤维细胞、白细胞在病毒核酸、多聚肌苷酸多聚胞苷酸(Poly IC)等干扰素诱生物质刺激下所分泌的一种糖蛋白。与α干扰素相似,β干扰素不仅在抗病毒固有免疫过程中发挥着重要作用,而且具有抗肿瘤、抗增殖和免疫调节等功能.

β干扰素是一种重要的I型干扰素，它是由成纤维细胞和白细胞所分泌的一种糖蛋白，在固有免疫和适应性免疫中起着重要的作用。

人β干扰素(IFN-β)ELISA试剂盒

β干扰素(IFN-β)是一种在抗病毒固有免疫应答过程中具有重要作用的细胞因子,而肝细胞作为肝炎病毒的宿主细胞被认为具有IFN-β诱生的能力。

选用毕赤酵母GS115为宿主,利用营养缺陷型、抗生素G418和免疫斑点法的组合筛选得到的转化子产量高达180 mg/L。经Western Blot实验验证,表达出的融合蛋白在结构上符合我们的要求。经过对菌株的摇瓶表达条件优化,利用有机培养基,接种、培养至36 h后转入pH6.0、甲醇浓度2%、诱导浓缩比3:1的条件下诱导表达,可得到218 mg/L的表达量。在5 L发酵罐的放大试验中,当发酵至100 h时菌浓和产量均达到zui高值,菌浓A600为350,表达量为500 mg/L。经过对于融合蛋白IFNβ-HSA的初步纯化条件的摸索,对其吸附、解吸附行为的规律有了进一步的了解。进而制定了新的纯化工艺,经过超滤浓缩、染料亲和层析、镍离子螯合亲和层析、阴离子交换层析几步分离得到了纯度大于95%的目的蛋白纯品,总回收率达到17%。

与Huh7和HepG2细胞相比,PH5CH8细胞经NDV与poly(I∶C)诱导可产生高水平的IFN-β。进一步利用蛋白免疫印迹法比较3株细胞系内IFN-β诱生信号通路相关蛋白的表达水平,结果显示,与PH5CH8细胞相比,Huh7和HepG2细胞内多种信号蛋白的表达水平偏低。

人β干扰素-人血清白蛋白融合蛋白(IFNβ-HAS)的前研究,本研究采用免疫学方法对毕赤酵母转化子进行筛选,得到高产菌株8株。在5L发酵罐上对高产菌株进行诱导表达,产量达500mg/L。发酵液经超滤浓缩、染料亲和层析、镍离子螯合亲和层析和DEAE离子交换层析纯化后,融合蛋白纯度达到96%。Westernblotting杂交表明融合蛋白具有人血清白蛋白和人β干扰素的抗原性,细胞病变抑制法测定IFNβ-HSA比活性为1.96×107IU/mg。建立了融合蛋白的生物试剂工艺,为IFNβ-HSA的前研究奠定了基础。 

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