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透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope,简称TEM),可以看到在光学显微镜下无法看清的小于0.2um的细微结构,这些结构称为亚显微结构或超微结构。
透射电镜制片步骤
1、 取材固定:新鲜组织确定取材部位,尽量减小牵拉、挫伤与挤压等机械损伤,组织体积一般不超过1mm×1mm×1mm ,迅速投入电镜固定液4℃固定2-4h。细胞离心至管底可以看到绿豆大小的细胞团块,弃去培养液加入电镜固定液4℃固定2-4h。0.1M磷酸缓冲液PBS(PH7.4)漂洗3次,每次15min。
2、 后固定:1%的锇酸·0.1M磷酸缓冲液PBS(PH7.4)室温(20℃)固定2h。0.1M磷酸缓冲液PBS(PH7.4)漂洗3次,每次15min。
透射电镜全套实验代测
3、 脱水:组织依次入50%-70%-80%-90%-95%-100%-100%酒精上行脱水,每次15min。
4、 渗透:丙酮︰812包埋剂=1︰1混合液渗透过夜,纯812包埋剂渗透过夜。
5、 包埋:60℃聚合48h。
6、 切片:切片机切片60—80nm超薄切片。
7、 染色:铀铅双染色(2%醋酸铀饱和水溶液,枸橼酸铅,各染色15min),切片室温干燥过夜。
8、 透射电子显微镜下观察,采集图像分析。