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柠檬酸合成酶(CS)实验代测
又称柠檬酸缩合酶,在三羧酸循环首步反应中,催化乙酰辅酶A的乙基与草酰乙酸的酮基结合生成柠檬酰辅酶A,以便后续高能硫酸键水解,释放出辅酶A,得到柠檬酸。柠檬酸合成酶是一个调控酶,此酶的底物乙酰辅酶A和草酰乙酸是它的激活剂,NADH、琥珀酰辅酶A是抑制剂。
即citrate synthetase,又称柠檬酸缩合酶,在三羧酸循环首步反应中,催化乙酰辅酶A的乙基与草酰乙酸的酮基结合生成柠檬酰辅酶A,以便后续高能硫酸键水解,释放出辅酶A,得到柠檬酸。柠檬酸合成酶是一个调控酶,NADH、琥珀酰辅酶A是抑制剂。乙酰辅酶A和草酰乙酸作为柠檬酸合酶的底物,其含量随细胞代谢状态而改变,从而影响柠檬酸合成的速率,是它的别构激活剂。
注意:正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义: CS(EC 2.3.3.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中,是三羧酸循环限速酶,是三羧酸循环主要调控位点之一。
测定原理:
CS催化乙酰CoA和草酰乙酸产生柠檬酰辅酶A,进一步水解产生柠檬酸;该反应促使无色的DTNB转变成黄色的TNB,在 412nm处有特征吸光值。
自备实验用品及仪器:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、无水乙醇和蒸馏水 。
柠檬酸合成酶(CS)实验代测