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磷酸果糖激酶(PFK)实验代测
测定原理:PFK催化果糖6-磷酸和ATP生成果糖-1,6-二磷酸和ADP,丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步一次催化NADH氧化生成NAD﹢,在340nm下测定NADH下降速率,即可反应PFK活性。
磷酸果糖激酶又叫6-磷酸果糖激酶-1(英语Phosphofructokinase;PFK)是一类激酶,可作用于果糖-6-磷酸 (fructose 6-phosphate)。在糖酵解中和己糖激酶、丙酮酸激酶一样催化的都是不可逆反应,因此这三种酶都有调节糖酵解途径的作用。2,6-二磷酸果糖是它的强变构激活剂。
可分为两种,分别产生不同产物:
由磷酸果糖激酶1作用可得果糖-1,6-双磷酸。 由磷酸果糖激酶2作用可得果糖-2,6-双磷酸。
该酶会受到高浓度ATP的抑制,高的ATP浓度
磷酸果糖激酶在呼吸作用中的调控作用会使该酶与底物果糖-6-磷酸的结合曲线从S形变为双曲线型。而柠檬酸就是通过加强ATP的抑制效应来抑制磷酸果糖激酶的活性,从而使糖酵解过程减慢。
因磷酸果糖激酶是糖酵解作用的限速酶,因此,对此酶的调节是调节酵解作用的关键步骤。
提取液:60mL×1瓶,4℃保存;试剂一:液体40mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1瓶,-20℃保存,临用前加入2.8mL双蒸水充分溶解备用;试剂三:液体×1支,-20℃保存,临用前加入260ul双蒸水充分溶解备用;试剂四:液体×1支,4℃保存,临用前加入260ul双蒸水充分溶解备用;
PFK工作液(可测25个样)的配制:取19mL试剂一和1.26mL试剂二充分混匀。
产品说明:
PFK(EC2.7.1.11)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,负责将果糖-6-磷酸和ATP转化为果糖-1,6二磷酸和ADP,是糖酵解过程的关键调节酶之一。
PFK催化果糖-6-磷酸和ATP生成果糖-1,6-二磷酸和ADP,丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH氧化生成NAD+,在340nm下测定NADH下降速率,即可反映PFK活性。
磷酸果糖激酶(PFK)实验代测