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植物总酚实验代测
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:植物酚类物质具有清除自由基,抗氧化抗衰老的作用,具有较高的营养价值和医疗保健作用而广泛应用于化妆品、食品、医药等领域。
测定原理:在碱性条件下,酚类物质将钨钼酸还原,产生蓝色化合物,在760nm处有特征吸收峰,测760nm处的吸光值,即可得样品总酚含量。
自备实验及仪器:天平、烘箱、粉碎仪、筛子、超声破碎仪、60%乙醇、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
试剂组成和配置:提取液:60%乙醇,自备。
试剂一:液体3mL×1瓶,4℃保存。 试剂二:液体5mL×1瓶,4℃保存。
总酚提取:将样本烘干至恒重,粉碎,过40目筛之后,称取约0.1g,加入2.5mL提取液,60℃振荡提取2h。10000g,25℃,离心10min,取上清,用提取液定容至2.5mL,待测
注意事项:1. 吸光值大于2,样品适当稀释再测定,注意计算公式里乘以稀释倍数。 2. 试剂一对皮肤有一定的刺激性,请操作时做好防护措施。 3. 低检出限为2.4 μg/g。
总酚含量计算公式:a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下 标准曲线:y = 5.615x+0.0012,R2 = 0.9994
总酚含量(mg/g 干重)=(ΔA-0.0012 )÷5.615×V样÷(V样÷V样总×W) = 0.445×(ΔA–0.0012 )÷W
V样总:加入提取液体积,2.5 mL; V反总:反应总体积,0.2mL;V样:反应中样品体积,0.01mL;W:样品质量,g b.用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 2.808x+0.0012,R2 = 0.9994
总酚含量(mg/g 干重)=(ΔA-0.0012 )÷2.808×V样÷(V样÷V样总×W) = 0.89×(ΔA–0.0012 )÷W
V样总:加入提取液体积,2.5 mL; V样:反应中样品体积,0.01mL;W:样品质量,g
植物总酚实验代测