植物总酚实验代测

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植物总酚实验代测

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：植物酚类物质具有清除自由基，抗氧化抗衰老的作用，具有较高的营养价值和医疗保健作用而广泛应用于化妆品、食品、医药等领域。
测定原理：在碱性条件下，酚类物质将钨钼酸还原，产生蓝色化合物，在760nm处有特征吸收峰，测760nm处的吸光值，即可得样品总酚含量。
自备实验及仪器：天平、烘箱、粉碎仪、筛子、超声破碎仪、60%乙醇、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
试剂组成和配置：提取液：60%乙醇，自备。 
试剂一：液体3mL×1瓶，4℃保存。 试剂二：液体5mL×1瓶，4℃保存。
总酚提取：将样本烘干至恒重，粉碎，过40目筛之后，称取约0.1g，加入2.5mL提取液，60℃振荡提取2h。10000g，25℃，离心10min，取上清，用提取液定容至2.5mL，待测
注意事项：1. 吸光值大于2，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。 2. 试剂一对皮肤有一定的刺激性，请操作时做好防护措施。 3. 低检出限为2.4 μg/g。
总酚含量计算公式：a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下 标准曲线：y = 5.615x+0.0012，R2 = 0.9994 
总酚含量（mg/g 干重）=（ΔA-0.0012 ）÷5.615×V样÷（V样÷V样总×W）                      = 0.445×（ΔA–0.0012 ）÷W 
V样总：加入提取液体积，2.5 mL； V反总：反应总体积，0.2mL；V样：反应中样品体积，0.01mL；W：样品质量，g b.用96孔板测定的计算公式如下 
标准曲线：y = 2.808x+0.0012，R2 = 0.9994 
总酚含量（mg/g 干重）=（ΔA-0.0012 ）÷2.808×V样÷（V样÷V样总×W）                      = 0.89×（ΔA–0.0012 ）÷W 
V样总：加入提取液体积，2.5 mL； V样：反应中样品体积，0.01mL；W：样品质量，g

植物总酚实验代测