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组织细胞葡萄糖氧化酶法测定试剂盒
原理:根据Trinder反应原理1,2,葡萄糖在葡萄糖氧化酶(GOD)作用下生成葡萄糖酸和过氧化氢(H2O2);然后用过氧化物酶(POD)催化过氧化氢,使色原物质(4-氨基安替比林)生成醌亚胺,颜色的深浅与葡萄糖浓度成正比。
适用范围:适用于动物实体组织、培养细胞中葡萄糖含量的测定。
操作步骤:
一.组织细胞裂解:
1、动物细胞:离心收集细胞后,通常情况下,可按比例每1x106 个细胞加入0.05-0.1mL裂解液,震荡裂解后室温静置10分钟。
2、实体组织:离心管精确称重,加入组织块后再称重,二者相减(即减量称重法)计算组织重量(约50mg)。建议按每1mg组织加入5-10µl裂解液,用玻璃匀浆器或者电动匀浆器匀浆破碎组织,匀浆后室温静置10分钟。
二.裂解液处理:取适量上清液转移到1.5mL离心管中,余下的裂解液可用BCA法蛋白定量试剂盒(P1511)进行蛋白定量或-20ºC储存。
三.工作溶液配制:按4:1比例,取8mL试剂R1与2mL试剂R2混合得到10mL 工作溶液。当天使用或4ºC保存1周。
四.标准品稀释:10mM葡萄糖标准品用蒸馏水或与样本缓冲液一致的液体稀释为2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625µM。注意设置0浓度对照反应管。由于葡萄糖测定反应的线性关系甚好且范围很宽,通常设置黑体标记的4管即可,一般不需要设置大于2~10mM的标准管,以此得到的标准曲线用来测定大于2mM葡萄糖浓度通常不会失真。世界卫生组织(WHO)也可仅设置单一浓度的标准管。
组织细胞葡萄糖氧化酶法测定试剂盒