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植物过氧-化氢染色液(DAB,pH5.5)
产品简介:
植物组织在胁迫环境条件下会产生多种活性氧(ROS),ROS 活性非常大且极其不稳定,因此 ROS 的检测通常因其最终产物而定。过氧-化氢是活性氧的一种。在过氧-化氢酶的催化下,过氧-化氢能与 DAB(3,3-二氨基联苯胺四盐酸盐)迅速反应生成棕红色化合物,从而定位组织中的过氧-化氢。
操作步骤(仅供参考):
1、试剂准备:将100 mg DAB加入到 100 mL磷酸缓冲液中充分溶解,即得DAB染色工作液,4℃避光保存,一周内有效;-20C保存,可适当延长保质期。注:DAB对光敏感,溶解过程需要避光,如果较难溶解,可通过超声、磁力搅拌等方法促溶。
2、样本准备:采集经胁迫(例如重金属)的植物幼苗或根尖,自来水稍洗净,置于滤纸上吸干多余的水分。
3、染色:将植物幼苗或根尖浸没在DAB染色工作染液中,常温避光染色2~6h,至阳性部位出现深棕色,其余部位近无色或者呈植物本身的颜色即可。(根据植物幼嫩程度和显色程度调整染色时间)
4、脱色:用镊子将植株幼苗或者叶片小心取出,浸入蒸馏水中来回漂洗3~5次,置于滤纸上吸干多余水分后,浸入95%乙醇中 40℃处理3~16 h,目的是脱去植株幼苗或者叶片本身的叶绿素,脱色期间可多次更换新鲜的95%乙醇.
5、观察:用镊子取出植株幼苗或者叶片,浸入蒸馏水中来回漂洗3~5次,置于滤纸上吸干多余水分后,将样本转入适量 DAB 样本保存液中浸泡30min,随后可取出拍照。样本可置于该保存液中常温保存一周。
有效期:12个月。低温运输,按要求保存。
植物过氧-化氢染色液(DAB,pH5.5)