谷-胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)测试盒 生化试剂

谷-胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)测试盒

测定意义

谷-胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase，GSH-PX）是机体内广泛存在的

一种重要的催化过氧化氢分解的酶。它特异的催化还原型谷-胱甘肽（GSH）对过氧

化氢的还原反应，可以起到保护细胞膜结构和功能完整的作用。GSH-PX 的活性中

心是硒半胱-氨酸，硒是 GSH-PX 的必需部分，每克分子酶含 4 克原子硒。测定 GSH-PX

的活力可以作为衡量机体硒水平的一项生化指标。

测定原理

谷-胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）可以促进过氧化氢（H2O2）与还原型谷胱甘

肽（GSH）反应生成 H2O 及氧化型谷-胱甘肽（GSSG），谷-胱甘肽过氧化物酶的活力

可用其酶促反应的速度来表示，测定此酶促反应中还原型谷-胱甘肽的消耗，则可求

出酶的活力。

GSH-PX 的活力以催化 GSH 的反应速度来表示，由于这二个底物在没有酶的条

件下，也能进行氧化还原反应（称非酶促反应），所以最后计算此酶活力时必须扣除

非酶促反应所引起的 GSH 减少的部分。

GSH 量的测定：GSH 和二硫代二硝基苯甲酸作用生成 5-硫代二硝基苯甲酸阴离

子呈现较稳定的黄色，在 412nm 处测其吸光度即可计算出 GSH 的量。

试剂盒有效期和保存条件

本试剂盒保存期：6 个月；贮存温度：4℃。

注 意

注 1：空白管、标准管一般只需做 1—2 只。

注 2：最佳取样量及最佳取样浓度因样品种类不同，其 GSH－PX 活力不一。

根据酶的百分抑制率与酶的活力呈抛物线关系 ，各种测定样品取样量及取样浓度

不一样，在每测定一种新的样品前最好选择一个最佳取样量及最佳取样浓度。

最佳取样浓度的摸索：

测试前先预试以确定最佳取样浓度：当您第一次使用本试剂盒测试某一种新

的样品时最好先做三只不同浓度的测试管。例如：

测全血：则分别取用蒸馏水 1︰24、1︰49、1︰99 稀释的溶血液 200μL 进行

预试；

测组织匀浆：则分别取 10%、5%、1%等的匀浆 200μL 进行预试（不同样本

稀释浓度不同）；

测血清：则分别取未稀释的血清及用生理盐水 1︰1、1︰4、1︰9、1︰19 稀

释的血清 100μL 进行预试，

结果应该在 15%～

55%之间，然后取百分抑制率在 45%或 50%左右的一管作为最佳取样浓度，因为

酶的百分抑制率与酶的活力呈抛物线关系，若百分抑制率大于 60%时（曲线的平

坦部分），则需将样品浓度稀释后再测试。若百分抑制率小于 20%时，则需将样

品浓度加大后测试。（需要注意的是组织匀浆或其他类似样本有时本身浊度或颜

色有干扰时，预实验不必通过抑制率计算，这时可以用对照 OD 值-测定 OD 值在

0.2 左右时来判定）

这样做对科研结果分析及检验有很大帮助；若百分抑制率大于 60％或小于 10％，

各个测定组的结果在检验中有可能无显著性差异。

全血中 GSH-PX 活力的测定

一、样本的前处理：溶血液的配制

①、取肝素抗凝全血 20μL，以蒸馏水稀释至 1ml，配成 1∶49 的溶血液；鼠血 10μL

加蒸馏水至 1ml，配成 1∶99 的溶血液。

②、充分混匀，放置 5 分钟直至使玻璃管中的溶血液对光呈透明状，方可进行

检测。

③、已配好的溶血液中 GSH-PX 活力只能保持 45～60 分钟，天冷时可延迟至 120

分钟。如果当天来不及测定则以抗凝全血冰箱（ 4℃～8℃）保存，2～3 天内

酶活力变化不大。

【注 1】请在正式实验前做预实验，详见溶血液的最佳取样浓度及最佳取样量的摸

索举例；

【注 2】测溶血液中 GSH－PX 含量要注意样品测试前红细胞一定要充分溶血。（以

对光观察透亮为标准，若不透亮可以冻溶一次，但有部分大鼠及猪的红细胞

是不可放置 0℃以下，否则不易溶血，例如糖尿病大鼠和部分正常大鼠的红

细胞冻后很难溶血。在做正式试验前最好先取 1～2 只样本做预试。）

组织、线粒体和细胞膜中 GSH－PX 活力的测定

一、样本的前处理：

1、10%组织匀浆的制备：

a.、取组织块（0.2～1 克）用冰冷的生理盐水漂洗，除去血液，滤纸拭干，称

重，放入 5～10ml 的小烧杯内。

b、用量筒量取预冷的匀浆介质（PH7.4，0.01mol/L 蔗糖，0.01mol/L Tris-HCl，

0.0001mol/LEDTA2Na 溶液）或生理盐水。匀浆介质或 0.86%生理盐水的量

应该是组织重量的 9 倍。

c、将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中，再将剩下的 1/3 匀浆介质或 0.86%生理盐

水用来冲洗残余在小烧杯中的碎组织一起倒入玻璃匀浆管中进行匀浆，左

手持匀浆管将下端插入盛有冰水的器皿中，右手将杆垂直插入套管中上下

转动研磨数十次（6～8 分钟），充分磨碎，使组织匀浆化。或者用组织捣碎

机 10000～15000r/min 研磨制成 10%组织匀浆，也可用内切式组织匀浆器制

成 10%组织匀浆（匀浆时间 10 秒/次，间隙 30 秒，连续 3～4 次，温度 0～

4℃），心肌组织等可延长匀浆时间。

d、将制备好的 10%匀浆用普通离心机或低温离心机 3000r/min 左右离心 10～

15 分钟。取上清待测。【注】根据预试结果取最佳浓度进行测定

2、线粒体的制备：

取 10%的组织匀浆 5～10ml，以 1000～2000r/min 离心 10 分钟（用普通离

心机或低温低速离心机），取上清液以 8000～10000r/min（低温高速离心机）离

心 15 分钟，沉淀物为线粒体。

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