糖化血红蛋白(GHb)测试盒 生化试剂
- 型 号:
- 参考价:0~0
糖化血红蛋白(GHb)测试盒,血红蛋白中具有酮胺键的糖化血红蛋白在酸性环境中加热,使己糖部分脱水,生成 5-羟甲基糠醛 (5-HMF)化合物,后者可与 TBA 反应呈黄色,然后进行比色定量。
糖化血红蛋白(GHb)测试盒
(15 管/14 样)
一、测定原理:
血红蛋白中具有酮胺键的糖化血红蛋白在酸性环境中加热,使己糖部分脱水,生成 5-羟甲基糠醛 (5-HMF)化合物,后者可与 TBA 反应呈黄色,然后进行比色定量。
二、试剂组成(15 管/14 样):
试剂一:液体 20mL×1 瓶,室温保存 6 个月。
试剂二:蛋白沉淀剂 20mL×1 瓶,室温保存 6 个月。
试剂三:显色剂 10mL×1 瓶,室温避光保存 3 个月。
试剂四:氰化高铁血红蛋白测试液 40mL×1 瓶,避光保存 3 个月。
三、操作过程:
1、红细胞洗涤:
取 EDTA 或肝素抗凝全血 2~4mL 置于带刻度离心管中,以 500~1000 转/分,离心 5~10 分钟, 弃上清留沉淀的红细胞,然后用生理盐水按上述方法洗涤 2~3 次。(若来不及洗涤抗凝全血可放置 48小时)
2、溶血液的制备:
①、取压积红细胞 1mL 加冷双蒸水 1.5mL,用手激烈震摇数分钟,或旋涡混匀器充分混匀 1 分钟制得溶血液,此溶血液-20℃保存,可放置 70 天。
②、溶血液的血红蛋白(Hb)浓度测定方法如下:
取溶血液 10ml 加试剂四 2.5mL,混匀,室温放置 10 分钟,用分光光度计在 540nm 处,1cm 光径水调零测各管吸光度;将所得吸光度×0.3677 即为 Hb 的含量 g/mL 。
3、酸化:
取玻璃试管,标明“0"即空白管,“U"即测定管,在“0"管中加入双蒸水 2mL,“U"管中加入溶血液 2mL,然后各管均加入试剂一 1mL 酸化。加试剂一要缓慢,边滴边摇边加入。
4、水解:
将上述试管加橡皮塞或塑料薄膜,(用针戳一小孔再用橡皮筋扎紧,将玻璃管口封住)。置沸水浴中或干燥箱 100℃加热水解 1 小时。
5、显色:
①、各管加试剂二(蛋白沉淀剂)1mL,(遇天冷时,水解液可能会凝固,可再加温使其溶解。)加试剂二要缓慢,边滴边摇边加入。加完后在旋涡混匀器上混匀,再 3000~3500 转/分,离心 10 分钟。
②、取上清 2mL,各加试剂三(显色剂)0.5mL,40℃水浴保温 30 分钟。
③、冷却后,双蒸水调零、443nm、1cm 光径,测各管的吸光度。
五、参考值:
正常时每 10 克血红蛋白中的糖化血红蛋白的吸光度值范围为 13.3~23.5。
六、附注:1、本法精密度较好,平均 CV 值为 4.2%。
2、溶血液如果未能及时测定,可贮存于-20℃的条件下达 70 天,不影响结果。
3、本法操作简便不需特殊仪器。
4、计算结果换算公式:
IFCC-HbAlc(%)=每 10 克血红蛋白的吸光度×0.001+0.0154,
IFCC- HbAlc(mmol/mol)=13×IFCC-HbAlc(%)×100-7.4,
DCCT- HbAlc(%)=(IFCC- HbAlc(mmol/mol))÷10.929+2.15)÷100。
糖化血红蛋白(GHb)测试盒