糖化血红蛋白（GHb）测试盒 生化试剂

糖化血红蛋白（GHb）测试盒

（15 管/14 样）

一、测定原理：

血红蛋白中具有酮胺键的糖化血红蛋白在酸性环境中加热，使己糖部分脱水，生成 5-羟甲基糠醛 （5-HMF）化合物，后者可与 TBA 反应呈黄色，然后进行比色定量。

二、试剂组成（15 管/14 样）：

试剂一：液体 20mL×1 瓶，室温保存 6 个月。

试剂二：蛋白沉淀剂 20mL×1 瓶，室温保存 6 个月。

试剂三：显色剂 10mL×1 瓶，室温避光保存 3 个月。

试剂四：氰化高铁血红蛋白测试液 40mL×1 瓶，避光保存 3 个月。

三、操作过程：

1、红细胞洗涤：

取 EDTA 或肝素抗凝全血 2～4mL 置于带刻度离心管中，以 500～1000 转/分，离心 5～10 分钟， 弃上清留沉淀的红细胞，然后用生理盐水按上述方法洗涤 2～3 次。（若来不及洗涤抗凝全血可放置 48小时）

2、溶血液的制备：

①、取压积红细胞 1mL 加冷双蒸水 1.5mL，用手激烈震摇数分钟，或旋涡混匀器充分混匀 1 分钟制得溶血液，此溶血液-20℃保存，可放置 70 天。

②、溶血液的血红蛋白（Hb）浓度测定方法如下：

取溶血液 10ml 加试剂四 2.5mL，混匀，室温放置 10 分钟，用分光光度计在 540nm 处，1cm 光径水调零测各管吸光度；将所得吸光度×0.3677 即为 Hb 的含量 g/mL 。

3、酸化：

取玻璃试管，标明“0"即空白管，“U"即测定管，在“0"管中加入双蒸水 2mL，“U"管中加入溶血液 2mL，然后各管均加入试剂一 1mL 酸化。加试剂一要缓慢，边滴边摇边加入。

4、水解：

将上述试管加橡皮塞或塑料薄膜，（用针戳一小孔再用橡皮筋扎紧，将玻璃管口封住）。置沸水浴中或干燥箱 100℃加热水解 1 小时。

5、显色：

①、各管加试剂二（蛋白沉淀剂）1mL，（遇天冷时，水解液可能会凝固，可再加温使其溶解。）加试剂二要缓慢，边滴边摇边加入。加完后在旋涡混匀器上混匀，再 3000～3500 转/分，离心 10 分钟。

②、取上清 2mL，各加试剂三（显色剂）0.5mL，40℃水浴保温 30 分钟。

③、冷却后，双蒸水调零、443nm、1cm 光径，测各管的吸光度。

五、参考值：

正常时每 10 克血红蛋白中的糖化血红蛋白的吸光度值范围为 13.3～23.5。

六、附注：1、本法精密度较好，平均 CV 值为 4.2%。

2、溶血液如果未能及时测定，可贮存于-20℃的条件下达 70 天，不影响结果。

3、本法操作简便不需特殊仪器。

4、计算结果换算公式：

IFCC-HbAlc（%）=每 10 克血红蛋白的吸光度×0.001+0.0154，

IFCC- HbAlc（mmol/mol）=13×IFCC-HbAlc（%）×100-7.4，

DCCT- HbAlc（%）=（IFCC- HbAlc（mmol/mol））÷10.929+2.15）÷100。

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