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多酚氧化酶测试盒 生化试剂

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多酚氧化酶测试盒,能够催化底物酚产生醌,后者在 420nm 处有特征性光吸收。PPO 主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是一种含铜的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化产生醌,从而引起褐化,与果蔬加工、茶叶品质等密切相关。

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多酚氧化酶测试盒

(多酚氧化酶 Polyphenol OxidasePPO ,分光光度测定法)

一、测定原理:

多酚氧化酶能够催化底物酚产生醌,后者在 420nm 处有特

征性光吸收。

二、测定意义:

PPO 主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是一种

含铜的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化产生醌,从而引起褐化,

与果蔬加工、茶叶品质等密切相关;同时酚类物质对病原微生物

有抑制和杀伤作用,具有一定的抗病能力。

三、试剂盒组成(50T/24 )

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四、自备仪器或用品:

可见光分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、

1cm 光径比色皿、研钵、蒸馏水、冰。

五、粗酶液提取:

1组织样本:组织称重(g):提取液体积(mL)为 1:5

1:10 的比例(例如取 0.2g 组织,加 1mL 提取液或 0.1g

组织加 1mL 提取液),进行冰浴匀浆;8000 /分钟常温

离心 10min(或 4000 /分钟离心 10min 后取上清再 4000

/分钟离心 10min),取上清待测(取部分上清液于 90℃

以上沸水浴中反应 5min 作为除非处理的粗酶液上清)。

2血清(浆)或果汁样本:取血清(浆)或果汁体积(mL):

提取液体积(mL)为 1:4 19 的比例(例如取 0.2mL

血清(浆)或果汁加入 0.8mL 提取液,或者取 0.1mL

清(浆)或果汁加入 0.9mL 提取液),涡旋混匀抽提 1min

8000 /分钟常温离心 10min(或 4000 /分钟离心 10min

后取上清再 4000 /分钟离心 10min),取上清待测(

出部分上清液于 90℃以上沸水浴中反应 5min 作为除非

处理的粗酶液上清)。

3、细菌或培养细胞:可用称重法或细胞计数法,详情参考

意事项

八、注意事项:

1、细菌或细胞样本前处理:A:称重法:提取时可以先取离心

管用万分之一天平称重,再收集细菌或细胞到离心管内,

1000 /分钟离心 5min 后弃上清,再次称重,减去空离心

管重量,再按 2mg):1000μL)或 1mg):1000μL

的比例加入提取液,超声破碎(冰浴,功率 20% 200W

超声 3s、间隔 10s,重复 30 次),8000 /分钟 4℃离心

10min,取上清待测,结果按照组织计算方法计算;B:细

胞个数法:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;

按照细菌或细胞数量(10 4个):提取液体积为 5001000:1

的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声

波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20% 200W,超声 3s

间隔 10s,重复 30 次);8000 /分钟常温离心 10min,取

上清待测

2、粗酶液提取完,吸出一部分在 90℃以上水浴中煮沸 5min

取出流水冷却,作为对照管煮沸的上清用。

3、试剂一在使用前先混匀使其分散后,再吸取进行提取。

4、本实验组织/细胞样本用试剂一提取很重要,提取后的粗酶

液除了测定蛋白以外,不能用于测定其他指标,以防止产

生干扰。

 多酚氧化酶测试盒

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