多酚氧化酶测试盒 生化试剂
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多酚氧化酶测试盒,能够催化底物酚产生醌,后者在 420nm 处有特征性光吸收。PPO 主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是一种含铜的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化产生醌,从而引起褐化,与果蔬加工、茶叶品质等密切相关。
多酚氧化酶测试盒
(多酚氧化酶 Polyphenol Oxidase,PPO ,分光光度测定法)
一、测定原理:
多酚氧化酶能够催化底物酚产生醌,后者在 420nm 处有特
征性光吸收。
二、测定意义:
PPO 主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是一种
含铜的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化产生醌,从而引起褐化,
与果蔬加工、茶叶品质等密切相关;同时酚类物质对病原微生物
有抑制和杀伤作用,具有一定的抗病能力。
三、试剂盒组成(50T/24 样):
四、自备仪器或用品:
可见光分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、
1cm 光径比色皿、研钵、蒸馏水、冰。
五、粗酶液提取:
1、组织样本:组织称重(g):提取液体积(mL)为 1:5 或
1:10 的比例(例如取 0.2g 组织,加 1mL 提取液或 0.1g
组织加 1mL 提取液),进行冰浴匀浆;8000 转/分钟常温
离心 10min(或 4000 转/分钟离心 10min 后取上清再 4000
转/分钟离心 10min),取上清待测(取部分上清液于 90℃
以上沸水浴中反应 5min 作为除非处理的粗酶液上清)。
2、血清(浆)或果汁样本:取血清(浆)或果汁体积(mL):
提取液体积(mL)为 1:4 或 1:9 的比例(例如取 0.2mL
血清(浆)或果汁加入 0.8mL 提取液,或者取 0.1mL 血
清(浆)或果汁加入 0.9mL 提取液),涡旋混匀抽提 1min;
8000 转/分钟常温离心 10min(或 4000 转/分钟离心 10min
后取上清再 4000 转/分钟离心 10min),取上清待测(取
出部分上清液于 90℃以上沸水浴中反应 5min 作为除非
处理的粗酶液上清)。
3、细菌或培养细胞:可用称重法或细胞计数法,详情参考 注
意事项 。
八、注意事项:
1、细菌或细胞样本前处理:A:称重法:提取时可以先取离心
管用万分之一天平称重,再收集细菌或细胞到离心管内,
1000 转/分钟离心 5min 后弃上清,再次称重,减去空离心
管重量,再按 2(mg):1000(μL)或 1(mg):1000(μL)
的比例加入提取液,超声破碎(冰浴,功率 20%或 200W,
超声 3s、间隔 10s,重复 30 次),8000 转/分钟 4℃离心
10min,取上清待测,结果按照组织计算方法计算;B:细
胞个数法:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;
按照细菌或细胞数量(10 4个):提取液体积为 500~1000:1
的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声
波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s、
间隔 10s,重复 30 次);8000 转/分钟常温离心 10min,取
上清待测
2、粗酶液提取完,吸出一部分在 90℃以上水浴中煮沸 5min,
取出流水冷却,作为对照管煮沸的上清用。
3、试剂一在使用前先混匀使其分散后,再吸取进行提取。
4、本实验组织/细胞样本用试剂一提取很重要,提取后的粗酶
液除了测定蛋白以外,不能用于测定其他指标,以防止产
生干扰。
多酚氧化酶测试盒