抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP) 染液 生化试剂

抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP) 染液

(Tartrate-Resistant Acid Phosphate stain)

[检验原理]

在酸性的缓冲液中，细胞内酸性磷酸酶催化底物水解，其生成物进而与一种稳定的重氮盐偶联,生成不溶性的偶氮染料沉淀，当底物中存在酒石酸时，该反应只出现在特异性细胞中。

[储存条件及有效期]

本试剂盒室温密封保存，有效期3 个月。所有应用液配置后要立即使用，当天一次用完。

[所需仪器]

光学显微镜、染缸、玻片、滴管、秒表、记号笔等。

O具体试剂配制及操作

一、固定液:液体，40mlx1 瓶

新鲜血涂片、细胞涂片或爬片、冰冻切片用固定液固定 5~10min。石蜡包埋的切片经脱腊后不需要再固定。

二、底物反应液(一) 、(二) 、(三) 、(四) 的组成及配制:

底物反应液(一) 组成及配制

组成:(1) A粉x1 支(2) B 液500ulx1 支(3) C粉x1 支(4) D 液500ulx1 支

配制: 临用前将 B 液用移液器吸入 A 粉中充分解配成甲液，备用再将 D 液移液器吸入 C粉中充分溶解配成乙液，备用最后将甲液与乙液混合成底物反应(一)，备用

底物反应液(二) 组成及配制:

组成:(1) E粉x1支(2) F 液 500ulx1 支

配制: 临用前将底物反应液二的 F 液移液器吸入 E 粉中充分溶解配成底物反应液(二),备用。

底物反应液(三): G液 lx1 支，备用

底物反应液(四) 组成及配制:

组成：(1) H粉x1 支(2) I液 500ulx1 支

配制: 临用前将 I液移液器吸入 H粉中充分溶解配成底物反应液四，备用。

底物孵育液的配制:

染色缸染色孵育法:

1. 将底物反应液(一)、(二)、(三)、(四)的备用液混合并充分混匀，

2. 先在染缸内加 30 ml蒸馏水，37℃水浴 10 分钟，

3. 将底物反应液(一)、(二)、(三)、(四)依次加入已预温的蒸馏水中,

4. 然后将样本玻片固定，水洗后还末干前,，立即将样本玻片放入已准备好的反应孵育液中，避光孵育 60 分钟。

三、复染液:苏木素液，10mlx1 瓶甲基绿液，10mlx1 瓶

孵育完后，取出水洗 1 分钟，在玻片尚未干之前进行复染。可用苏木素复染 1-2 分钟,或用甲基绿复染 2~3 分钟，两者取其一。

[样本染色前处理及染色]

O 血涂片及骨髓涂片

1、推片: 取全血或骨髓3 微升左右置载玻片上，将推玻片保持与载玻片 30 度角，置于血滴正前方，稍往后移与血滴接触，血滴沿推片下缘散开，再匀速沿载玻片平面平稳向前滑动，至血液铺完血膜为止。满意效果为不太薄，以免细胞太少，也不要太厚，以免太重叠。

2、凉干:使涂片在空气中自然凉干，再放入本试剂盒中的固定液内固定 2~3 分钟， 水洗约30-60 秒

3、一定注意水洗后不要太干时放入底物液中孵育 60 分仲 (太干后染色效果欠佳)

O石蜡切片

1、二甲苯中脱蜡 5-10 分钟。再换用新鲜的二甲苯，脱蜡 5-10 分钟

2、无水乙醇5 分钟。再 90%、70%乙醇各2 分钟。

3、水合:蒸馏水2 分钟

O 冰冻切片

1、回温: 将预先制作好的并保存在-20℃冰箱中的冰冻切片放置到切片架上回温 约 5-10 分钟。

注]:

①　可放到37C孵箱中进行回温；

②　在 37℃水浴箱中放置一个小盒子，再将从冰箱中取出的切片架放到小盒当中，目的是让冰冻切片回温到 37℃

2、水合:将回温好的切片，水中浸泡 1~2 分钟

[染色结果]

阳性反应为鲜红色或深红色颗粒，定位胞浆。

抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP) 染液