ATP 酶测定试剂盒（测普通组织匀浆） 生化试剂

ATP 酶测定试剂盒（测普通组织匀浆）

(货号：A016-2 不高速可测 Na +k +、Ca 2+Mg 2+、Ca 2+、Mg 2+-ATPase)

此试剂盒可测不需要高速离心的红细胞膜以及不需要高速离心的组织匀浆中的 ATP 酶。

一、试剂组成与配制(50 管/48 样 A016-2-1)：

试剂一：液体 10mL×3 瓶，4℃保存 6 个月。

试剂二：液体 10mL×1 瓶，4℃保存 6 个月。

试剂三：液体 10mL×1 瓶，4℃保存 6 个月。

试剂四：粉剂×3 支，-20℃以下保存 6 个月。用时每支

加双蒸水 5mL，现用现配。余下的-20℃以下可

保存一周。

试剂五：粉剂×1 支，

4℃保存 6 个月。用时加双蒸水 5mL，

适当加热溶解，4℃保存 3 个月。

试剂六：粉剂×1 支，4℃保存 6 个月。用时加双蒸水

10mL[注 1]，充分加热使其溶解，室温保

存。

试剂七：液体 10mL×2 瓶，室温保存 6 个月。

试剂八：粉剂×3 瓶，

4℃保存 6 个月。用时每瓶加水 40mL

溶解。(溶解后避光 4℃可保存一周)。

试剂九：粉剂×1 瓶，4℃保存 6 个月。用时加水 100mL

溶解，室温保存 3 个月。

试剂十：2.5mol/L 硫酸 100mL×1 瓶，室温保存 6 个月。

试剂十一：10mmol/L 标准磷贮备液 10mL×1 瓶，4℃保

存 6 个月。0.5μmol/mL 标准磷应用液配制：用

时将贮备液 20 倍稀释，即取 0.5mL 加蒸馏水

定容至 10mL。

定磷剂的配制：按双蒸水: 2.5mol/L 硫酸:试剂八:试剂九

=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄

色，若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，

定磷剂现用现配。

[注 1]：试剂六为过饱和溶液，所以在配制时最好用

90℃～100℃的热蒸馏水 10.3mL(热胀冷缩)边

隔水加热边用玻璃棒搅拌，以使其充分溶解。

一次实验用不完再用时可能有结晶，用之前可

以再次边隔水加热边玻璃棒搅拌使其溶解。

[注 2]： 配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，

也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

四、如果您的样本很多可以采用简便操作法：

测试前 A、B、C、D、E 五种混合试剂的配制：

根据规范操作表中 A、B、C、D、E 各管的试剂量

乘以您所需要测试的样本数(n)再放宽 1～2 只的量(避

免吸到最后试剂量不够)，然后纵向混合。 

六、测定意义：

ATP 酶存在于组织细胞及细胞器的膜上，是生物膜

上的一种蛋白酶，它在物质运送、能量转换以及信息传

递方面具有重要的作用。

七、测定原理：

ATP 酶可分解 ATP 生成 ADP 及无机磷，测定无机磷的

量可判断 ATP 酶活力的高低。

八、注意点：

1、此法具有微量、灵敏、快速的特点。所以对测定所用试

管要求严格，要没有一点磷，若试管放过磷酸或磷酸盐

缓冲液，一定要洗得非常干净，要先用洗洁精加水煮，

再用自来水冲，最后用蒸馏水冲干净。最好用一次性塑

料管或新玻璃管，避免磷污染是检测成败的关键。

2、定磷剂配好后，不可放置太久，一般保存一天，最好现

用现配。随时放冰箱。

3、最好采用先配 A、B、C、D、E 五种混合液中的几种，

然后按简化操作步骤进行检测。这样快捷、准确。

4、所有配试剂的器皿均要专用，包括吸硫酸的吸管及盛水

的器皿，最好用新的。

5、本研究所有加厚的一次性塑料试管供应，请在订购试剂

的同时订购一次性塑料试管。

附录Ⅰ：样本前处理

一、样本前处理：

1、全血的前处理：

①、红细胞计数(详见附录Ⅱ)或血红蛋白测定。两者

只需测其中一样。

②、洗涤红细胞：取肝素抗凝全血 1mL，(若血样较

少，则可以按一定比例减少血样及各试剂的用

量。)加 4 倍左右的生理盐水(0.86%NaCL 液)，

轻轻混匀，

1000～1500 转/分，离心 5～10 分钟，

弃上清留沉淀的红细胞。

③、制备溶血液：在上述沉淀的红细胞中加入 1.5mL

双蒸水，将试管放在旋涡混匀器上混匀 30 秒，

放置 15 分钟。再混匀 30 秒，再放置 15 分钟，

使其充分溶血，直至溶液透亮。糖尿病大鼠的

红细胞是不可以冰冻，否则越冻越不溶血。

④、取溶血液按操作表进行 ATP 酶检测和血红蛋白

测定。

2、组织的前处理：准确称取组织重量按重量(g):体积

(mL)=1:9 的比例加入 9 倍体积的生理盐水，冰

水浴条件下，机械匀浆，制备成 10%的匀浆液，

2500 转/分离心 10 分钟，取上清 0.2mL加 0.8mL

生理盐水稀释成 2%的匀浆待测。(取得的上清

液同时测一下相应样本的蛋白浓度，总蛋白测

定试剂盒，本所有售，推荐 A045-2，考马斯亮

兰法)

3、培养细胞的前处理：将培养细胞消化，离心，弃上

清，留下层细胞，用生理盐水或匀浆介质制备

成 10 7 /cm3的悬液，即 10 7 /mL 的悬液，再进行

破碎。破碎细胞的方法有三种：①、用匀浆器

匀浆。(可以用匀浆机，也可以用玻璃匀浆器手

工匀浆。)②、用进口的超声粉碎器粉碎。③、

反复冻溶 3 次。(第③种方法有时会影响酶活

力。)制备好的匀浆液不需要离心，在测试加样

前要摇匀后取样。(破碎好的匀浆液同时测一下

相应样本的蛋白浓度，总蛋白测定试剂盒，本

所有售，推荐 A045-4，BCA 法)

二、参考取样量：

溶血液一般取 200μL，2%组织匀浆一般取 200μL，

细胞悬液一般取 200～300μL。如果您的样本量很少，请

用超微量 ATP 酶检测方法。

附录Ⅱ：红细胞计数法

红细胞计数有以下三种方法，只需取其中一种即可以。

(我所有制备好的曲线供您参考。)

1、计数板直接红细胞计数：

①、红细胞稀释液的配制：柠檬酸三钠 3.8 克，甲醛 1mL，

蒸馏水 100mL，混匀，4℃保存。

②、取 1 支试管，加入红细胞稀释液 2mL，取抗凝全血

10µL 加入试管稀释液中，反复吹吸数次，再将试管

颠倒数次混匀。

③、取一滴稀释血液灌入计数板。(应一次灌满，而且不

要灌得太多。)

④、用高倍镜计数左上、左下、右上、右下，中央 5 个中

方格的红细胞数，将数得的数字×10 10，即为每升血

中的红细胞数。

2、光电比浊法计红细胞数：

取试管 1 支，加入上述红细胞稀释液 4mL，再取 20µL

抗凝全血，加入 4mL 稀释液中，反复吹吸数次，再将试

管颠倒数次混匀，立即倒入比色杯中，于 540nm，1cm 光

径，蒸馏水调零进行比色，记下吸光度值。以计数板计数

的红细胞的数值为横坐标，以相应管的吸光度值为纵坐

标，作标准曲线。您可以不做曲线，用附录Ⅲ的参考标

准曲线图二(鼠红细胞数与比浊法吸光度换算曲线)。根据

标准曲线查出红细胞数。

3、用血红蛋白(Hb)来换算红细胞数：

取 10µL 抗凝全血加入 2.5mL 血红蛋白测试液中，混

匀，静置 10 分钟，于 540nm，1cm 光径，蒸馏水调零进

行比色。将测得的吸光度乘以 367.7 即为血红蛋白的值。

以计数板计数的红细胞的数值为横坐标，以相应管的血红

蛋白数为纵坐标，作标准曲线。您可以不做曲线，用附录

Ⅲ的参考标准曲线图一(鼠红细胞数与血红蛋白数的换算

曲线)。根据标准曲线查出红细胞数。

ATP 酶测定试剂盒（测普通组织匀浆）