柠檬酸（Citric Acid,CA）试剂盒，是生物体内常见的有机酸，是重要的食品风味物质。此外，CA 是三羧酸循环第一步反应的产物。

柠檬酸（Citric Acid,CA）试剂盒

（50T/48 样）

一、测定意义

柠檬酸（CA）是生物体内常见的有机酸，是重要的

食品风味物质。此外，CA 是三羧酸循环第一步反应的产

物。

二、测定原理

酸性条件下，柠檬酸还原 Cr 6+生成 Cr 3+ ,Cr 3+在 545nm

处有特征吸收峰；通过测定 545nm 吸光值的增加，即可

计算出样品中柠檬酸含量。

三、自备实验用品及仪器。

水浴锅、低温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃

比色皿、可调式移液枪和蒸馏水。

四、试剂组成和配制

试剂一：液体×1 瓶，4°C 保存；

试剂二：液体×1 瓶，4°C 保存；

试剂三：液体×1 支，-20°C 保存；

试剂四：粉剂×1 瓶，室温保存；临用前加入 5mL 试剂一，

充分溶解配置；

试剂五：液体×1 瓶，4°C 避光保存；

标准品：液体×1 支，250μmol/L 柠檬酸标准液，4°C 保存。

五、样品中柠檬酸提取

1、液体样品中柠檬酸提取：取 0.1mL 液体加试剂一 0.9mL，

充分混匀，11000g，4°C 离心 10min，取上清液待测；

2、组织中柠檬酸提取：按照组织质量（g）:提取液体积

（mL）为 1:5 至 10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，

加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆，11000g；4°C 离心

10min，取上清液置冰上待测；

3、线粒体中柠檬酸提取：按照组织质量（g）：提取液体

积（mL）为 1：5 至 10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，

加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆；

600g，

4°C 离心 5min；

取上清至另一 EP 管中，11000g，4°C 离心 10min，弃

上清；向沉淀中加 200μL 试剂二，与 2μL 试剂三，充

分悬浮溶解，11000g；4°C 离心 10min，取上清液待测。

4、细菌、真菌中：按照细胞数量（10 4 个）：试剂一体积

（mL）为 500-1000:1 的比例（建议 500 万细胞加入试

剂一 1mL），冰水浴超声破碎细胞（功率 300W，超声

3 秒，间隔 7 秒，总时间 3 分钟），11000g；4°C 离心

10min，取上清液待测。

八、注意事项

1、样品处理等过程均需在冰上进行；

2、试剂四需现配现用；

3. 试剂五中含有致癌物质，实验过程中，请佩戴手套，

避免试剂五溅到皮肤上；

4. 柠檬酸提取液不能用于蛋白含量测定，如需测定蛋白

含量，需另取组织，使用本研究所蛋白质含量检测试

剂盒（考马或 BCA 法）。

 柠檬酸（Citric Acid,CA）试剂盒