糖原（Glycogen）测定试剂盒 生化试剂

糖原（Glycogen）测定试剂盒

（比色法）

一、测定原理：

糖原（Glycogen）在浓硫酸的作用下可脱水生成糖醛衍

生物，后者再与蒽酮作用形成蓝色化合物，与同法处理的标

准葡萄糖溶液比色定量。糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在

显色之前先将组织放入浓碱中加热以破坏其它成分而保留糖

原。

二、试剂组成与配制：（50 管/48 样）

试剂一：碱溶液，40mL×1 瓶，室温或 2～8℃保存 6 个月。

试剂二：1mg/mL 葡萄糖标准贮备液，1mL×1 支，室温或 2～

8℃保存 6 个月。临用前将 1mg/mL 葡萄糖标准品贮

备液∶双蒸水=1∶99 的比例混合配成 0.01mg/mL 葡

萄糖标准应用液，现用现配，当天有效。

试剂三：显色剂，粉剂×6 支，室温或 2～8℃保存 6 个月。用

时每支加浓硫酸 25mL（浓硫酸自备），混匀，现用

现配。

显色剂配制的注意点：

1、浓硫酸浓度必须 95%-98%的分析纯并且不可开瓶太久

（开瓶放置太久，浓度会降低）。

2、配制显色剂的容器和量筒必须绝对干燥，否则会使试剂

三无法充分溶解。

3、配制显色剂时：先将粉剂倒入烧杯中，然后加少量浓硫

酸（约 10mL），用玻棒压碎粉剂，使其充分溶解，然

后再加入剩余的浓硫酸，充分搅拌后室温避光保存。

三、样本前处理：

1、组织样本处理：

① 取样：取组织样本（如肝脏或肌肉）用生理盐水漂洗后，滤

纸吸干，称重（样本重量≤100mg 为宜，不要＞100mg）。

② 水解：按样本重量（mg）∶碱液体积（μL）=1∶3，一起加

入试管中，沸水浴煮 20min，流水冷却。

例如：肝脏组织称重 75mg 按重量体积比 1∶3 应加入碱

液的量为 225μL；肌肉组织称重 85mg 按重量体积

比 1∶3 应加入碱液的量为 255μL。

③ 将糖原水解液进一步制备成糖原检测液：

肝糖原检测液为 1%，加双蒸水的量为：肝脏重量×100 - 肝

脏重量×4*=肝脏重量×96

肌糖原检测液为 5%，加双蒸水的量为：肌肉重量×20 - 肌

肉重量×4*=肌肉重量×16

注：4*为水解时碱液与组织的体积数。

例如上例：制备 1%肝糖原检测液，加双蒸水的量为：

75×96=7200μL =7.2 mL；制备 5%肌糖原检测液，加双蒸水

的量为：85×16=1360μL =1.36mL。

2、细胞样本前处理：

① 细胞沉淀的收集（细胞数量在 100 万个以上）：

⑴、对于悬浮培养的细胞，直接取细胞悬液，1000rpm/分钟

离心 10 分钟，弃上清留细胞沉淀。

⑵、对于贴壁培养的细胞，用胰-酶将细胞消化下来，或用细

胞刮将细胞刮下来，制成细胞 悬液，1000rpm/分钟 离

心 10 分钟，弃上清留细胞沉淀。

② 细胞沉淀的洗涤：

在细胞沉淀中加入 0.5～1mL的缓冲液（0.1mol/L pH7～

7.4 磷酸盐缓冲液或生理盐水）， 轻轻混匀，1000rpm/分

钟离心 10 分钟，弃上清留细胞沉淀。

③ 水解：

⑴ 破碎后水解（适用于未知细胞数量或者细胞数量差异

较大的样本）：细胞沉淀加入 0.2～0.5mL 缓冲液（0.1mol/L

pH7～7.4 磷酸盐缓冲液或生理盐水），冰水浴条件下超声

破碎或手动匀浆，不离心，直接取样（取出部分测总蛋白

浓度，总蛋白浓度测定试剂盒本所有售，推荐 A045-3/-4，

BCA 法总蛋白测定试剂盒）0.05mL 加入碱溶液 0.15mL,

沸水浴 20 分钟，流水冷却，即为糖元检测液。

⑵ 不破碎直接水解（适用于细胞总数相近或不考虑细胞

总数的样本）：每管中加入碱溶液 0.225mL,沸水浴 20 分

钟，流水冷却，加双蒸水 0.225mL，即为糖元检测液。

附录Ⅰ：脂肪肝样本糖原测定

一、样本前处理：

1、取样：取新鲜肝脏样本用生理盐水漂洗后，滤纸吸干，称

重（样本重量≤100mg 为宜，不要＞100mg）。

2、水解：按样本重量（mg）∶碱液体积（μL）=1∶3，一起

加入试管中，沸水浴煮 20min，流水冷却。

3、将糖原水解液进一步制备成糖原检测液：

肝糖原检测液为 5%，加双蒸水的量为：

肝脏重量×20 - 肝脏重量×4*=肝脏重量×16

注：4*为水解时碱液与组织的体积数。

4、检测液除脂：取上述制备好的检测液（一般可见检测液上

层漂浮有乳白色油状物），加入一定量的氯仿，可

按照检测液量(mL)：氯仿(mL)=4:1,漩涡混匀，3500

转/分钟离心 10 分钟，取上清用于测定（如含量较高，

需稀释后再测定）。

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