低-密度脂蛋白胆-固醇(LDL-C)测试盒 生化试剂
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低-密度脂蛋白胆-固醇(LDL-C)测试盒,培养液样本:吸取培养液,1000 转/分钟,离心 10分钟,取上清测定。
低-密度脂蛋白胆-固醇(LDL-C)测试盒
(直接法 微板法)
一、试剂组成及配制(96T):
二、测定步骤:
1、样本处理:
①、血清(浆):直接测定,如超过线性范围用生理盐水稀
释后测定。
②、培养液样本:吸取培养液,1000 转/分钟,离心 10
分钟,取上清测定。
[注]:一般建议细胞密度在 100 万个/mL 以上。
③、组织样本:准确称取组织重量,按重量(g):体积
(mL)=1:9 的比例,加入 9 倍体积的匀浆
介质,冰水浴条件下机械匀浆,2500 转/
分,离心 10 分钟,取上清液待测。
[注]:1、如组织样本为非高脂样本,匀浆介质统一用磷酸
盐缓冲液(0.1mol/L pH 7.4)或生理盐水进行提取。
2、如组织样本为高脂样本或部分为高脂样本,匀浆
介质可统一用无水乙醇进行提取。
④、细胞样本:
A、细胞收集:将制备好的细胞悬液取出,1000 转/
分,离心 10 分钟,弃上清液,留细胞沉淀;用
等渗缓冲液(推荐 0.1mol/L 、pH7~7.4 磷酸盐
缓冲液)清洗 1~2 次,同样 1000 转/分,离心
10 分钟,弃上清液,留细胞沉淀;
B、细胞破碎:加入 0.2~0.3mL 的匀浆介质(推荐
0.1mol/L、pH7~7.4 磷酸盐缓冲液或生理盐水)
进行匀浆,冰水浴条件下超声破碎(功率:300W,
3~5 秒/次,间隔 30 秒,重复 3~5 次)或手动匀
浆,制备好的匀浆液不离心直接测定。也可采
用裂解液裂解(推荐 TritonX-100,1~2%,裂解
30~40 分钟),裂解好的液体不离心直接测定。
[注]:一般建议细胞密度在 100 万个/mL 以上。破碎好的
液体可显微镜观察细胞是否破碎
七、参考文献:
1 、 G Schectman,M Patsches,EA Sasse.Clin.Chem.May
1996;42:732-737.
低-密度脂蛋白胆-固醇(LDL-C)测试盒