信帆生物：QPCR实验技术服务

信帆生物：QPCR实验技术服务

信帆生物主营产品: 质控样品，干扰物质，抗体抗原，elisa试剂盒，动物血制品，生化试剂盒等。实验代做服务：HE染色/特殊染色/技术服务、免疫组化实验服务、Western blotting实验服务、RT-PCR实验技术服务,QPCR(荧光定量PCR）、酶联免疫ELISA、生化测试、液相气相检测等。

荧光定量PCR是通过荧光染料(SYBR Green)或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。可以用于检测mRNA/lncRNA/circRNA的基因表达水平。每个样本默认做3个复孔的技术重复。

实验原理（仅供参考）：

qPCR 在 PCR 扩增体系加入荧光基团，随扩增产物累积，荧光信号同步增强。仪器实时监测荧光变化，记录 Ct 值；起始模板浓度越高，Ct 值越低。提取组织 RNA 反转录得到 cDNA，扩增目的基因与内参基因，采用 2^(-ΔΔCt) 法计算，实现基因 mRNA 水平相对定量。 

实验流程：

1、样本预处理：小鼠组织离体迅速液氮速冻。

2、RNA 提取：Trizol 法提取总 RNA，检测 RNA 浓度与完整性。

3、反转录：RNA 逆转录合成 cDNA。

4、qPCR 扩增：配置反应体系，上机扩增，同步采集荧光信号。

5、数据分析：计算 Ct 值，2^(-ΔΔCt) 法得到基因相对表达量。

注意事项：

1、RNA 极易降解，全程无 RNase 耗材，样本禁止反复冻融。

2、取材快速，组织块尽量切小，离体立即液氮速冻。

3、实验设置内参、阴性对照，排除基因组 DNA 污染。

4、配制体系冰上操作，防止引物、酶失活；避免气溶胶核酸污染。

样本寄送与保存要求

1、组织 / 细胞裂解样本：分装冻存，-80℃保存，干冰运输，避免反复冻融

2、血清 / 血浆样本：分离后 - 20℃或 - 80℃保存，干冰寄送

3、样本标记清晰，附带样本信息表，注明分组、编号、重复数

4、样本寄送前可提前沟通，确认样本稳定性与保存条件