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信帆生物提供:促黄体生成素(LH) 实验技术服务
促黄体生成素(LH)是由垂体分泌的一种关键生殖激素。在女性体内,LH的周期性高峰能触发排卵,并维持黄体功能以分泌孕激素。在男性体内,它则刺激睾丸间质细胞产生睾酮。
检测原理(仅供参考)
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被促黄体生成素(LH)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的促黄体生成素(LH)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
性能指标:
1、检测范围:1.5 mIU/mL – 48 mIU/mL。
2、灵敏度:最小检测浓度小于0.1 mIU/mL。
3、特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4、重复性:板内变异系数小于10% ,板间变异系数小于15% 。
样品收集、处理及保存方法:
以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中,不得使用叠氮钠做为防腐剂。
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2. 血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3. 细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
4. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。