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明胶酶谱法实验中:凝胶蛋白质考马斯亮蓝染色操作步骤以及说明

更新时间:2015-08-03   点击次数:4040次

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常规考马斯亮蓝SDS-PAGE 凝胶蛋白质染色是实验室常用的凝胶染色方法。银染方法虽然灵敏度
高,但所需试剂复杂并且有毒有害,操作步骤繁琐,难以控制获得好的染色效果。

染色步骤:
1. 此染色液即为工作液,使用时直接将聚丙烯酰胺凝胶放在培养皿中以考马斯亮蓝染色液覆盖凝
胶,并缓慢摇动2h;
2. 倾去染色液,用脱色液冲洗凝胶;
3. 以脱色液覆盖凝胶,缓慢摇动2h,倾去脱色液,再加入新脱色液进行脱色,直至获得清晰的
蓝色的条带和干净的背景(通常此过程需要2~4h,也可脱色过夜至清晰的蓝色的条带和干净
的背景);
4. 对凝胶进行分析和照相,凝胶可放置在7%的乙酸中保存。也可用凝胶干胶装置(P2000)对
凝胶进行处理后保存。
安全性:含有甲醇,无特殊毒性,按一般化学品操作规程处理。
说明:
1. 染色液配方:0.25g 考马斯亮蓝R250+420ml 甲醇+100ml 冰乙酸,定容至1000ml,混合1h 后用
Whatman 1 号滤纸过滤,于室温可无限期保存;
2. 脱色液配方:冰醋酸:甲醇:水=7:5:88(V:V:V);
3. 保存液:7%冰醋酸;
4. 凝胶染色之后,染色液可以回收利用,装入新容器内,室温或4 oC 保存,可反复使用2-4 次。

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