小鼠白细胞介素1β（IL-1β）ELISA试剂盒如何正确使用

上海信帆生物供应小鼠白细胞介素1β（IL-1β）ELISA试剂盒，质量稳定，库存充足，多家科研院校订购过，并发表过多篇文章，欢迎垂询！

小鼠白细胞介素1β（IL-1β）ELISA检测试剂盒

检测原理

试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被小鼠白细胞介素1β（IL-1β）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠白细胞介素1β（IL-1β）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法

在收集样本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天就进行检测的样本，及时储存在4℃备用。对于隔天再检测的样本，及时分装后冻存在-20℃备用，有条件的，好-70℃冻存备用。标本应避免反复冻融。

液体类标本: 包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。
5.培养细胞：检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
6.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂，用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性

自备物品

酶标仪（450nm）
高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
37℃恒温箱
操作注意事项

  试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡60分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶*溶解后再使用。样本在使用前也要在室温平衡60分钟。
  实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
  预处理后的样本无需稀释，直接取10μL加样即可。
  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
  所有液体组分使用前充分摇匀。

洗板方法

  手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
  自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

结果判断

 绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

试剂盒性能

 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
 灵敏度：低检测浓度小于0.1 pg/mL。
 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
 重复性：板内变异系数小于10%、板间变异系数小于15%。
 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
 有效期：6个月

小鼠白细胞介素1β（IL-1β）ELISA试剂盒如何正确使用