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做Western Blot实验的时候,细胞样本应该如何处理
更新时间:2021-02-19 点击次数:2442次做Western Blot实验的时候,细胞样本应该如何处理
上海信帆生物代做WB实验,代测时间为2到3周,提供实验数据,包括所有试剂,提供分析数据、步骤等,如果你想了解该实验服务的详细信息,可以找上海信帆生物!
细胞样本做WB检测
1、悬浮细胞样品:把细胞及培养液一起收集到15ml或者50ml离心管中,1500rpm离心3min,弃去上清;加入PBS轻轻吹打,1500rpm离心3min,弃去上清;反复3次,弃去上清后于-80度或者液氮冻存待用。在避免冻融的情况一般保存1年,建议尽快检测。
2、贴壁细胞样品:
2.1 胰酶消化:用胰酶将细胞消化后,收集到15ml或者50ml离心管中,1500rpm离心3min,弃去上清;加入PBS轻轻吹打,1500rpm离心3min,弃去上清;反复3次,弃去上清后于-80度或者液氮冻存待用。在避免冻融的情况一般保存1年,建议尽快检测。
2.2 细胞刮子收集细胞:对于某些蛋白(即对胰酶比较敏感或者实验特殊要求,如E-Cadherin不易用胰酶消化后进行WB检测),直接用细胞刮子刮下细胞,收集到EP、15ml或者50ml离心管中,1500rpm离心3min,弃去上清;加入PBS轻轻吹打,1500rpm离心3min,弃去上清;反复3次,弃去上清后于-80度或者液氮冻存待用。在避免冻融的情况一般保存1年,建议尽快检测。
做Western Blot实验的时候,细胞样本应该如何处理