过氧化氢酶（CAT）测定试剂盒（动物组织）

过氧化氢酶（CAT）测定试剂盒（动物组织）

（紫外法）

一、测定意义：

氢氧自由基（OH·）是化学性质最活泼的活性氧，它

几乎与细胞内的每一类有机物如糖、氨基酸、磷脂、核苷

酸和有机酸等都能反应，并且有非常高的速度常数，因此

它具有破坏性，但它可以被过氧化氢酶分解，因而测定

过氧化氢酶的高低就有其重要意义。

二、测定原理：

红细胞或组织中过氧化氢酶（Catalase）在一定条件下

能直接分解其底物过氧化氢（H2O2），使 H2O2 在反应液

中的浓度逐渐降低，相应的吸光度也逐渐下降。

三、试剂组成与配制（100 管/96 样）：

试剂一：30mL 水剂贮备液×1 瓶，4℃可保存 6 个月。

试剂二：甲粉×1 瓶，乙粉×1 瓶，4℃可保存 6 个月。用时

各加双蒸水 200mL，溶解后混合一起，再用

双蒸水定容至 500mL，配成试剂二应用液，4℃保

存 3 个月。

五﹑操作步骤：

1﹑样本前处理：

①﹑溶血液的制备：

取老鼠的新鲜血液 50μL 加双蒸水至 2.5mL

混匀配成 1:49 溶血液。

②﹑1%肝组织匀浆的制备：

按《实验方法学》制备 10%肝组织匀浆，再

取部分 10%肝组织匀浆,用生理盐水按

1︰

9 稀释制备成 1%肝组织匀浆。

注：如果样本（脑组织、神经组织等）的 CAT 活力太低，

可以加大样本浓度或增加取样量。

2﹑测定过程：

取 1cm 光径石英比色皿，紫外 240nm，双蒸水调零

备用。取经过前处理的样本 0.02mL 加入比色皿底部，

将已预温至25℃，OD在0.5～0.55 之间的底物溶液3mL

直接用 5mL 或 10mL 的大移液器快速冲入比色皿中，

240nm 处立即测定吸光度，记下 A1值，比色皿不要取

出，1 分钟时立即再测一次吸光度，记下 A2 值。（没

有大移液器可用滴管或细玻棒快速混匀 1～2 次）

七、注意点：

1、为了减少误差，两只石英比色杯要进行校正。

2、每次加样前比色杯要用双蒸水冲洗 2～3 次，扣干备用。

3、每次比色前（加样前）比色杯的透光面要用擦镜纸擦干

净。

4、比色与计时要同步，最好为二个人或者用自动生化分析

仪。

5、加样品量不可太大，以免产生气泡影响吸光度。

6、1:100 的溶血液放置室温下不可超过 2 小时。

7、脑组织和神经组织中过氧化氢酶活力非常低。

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