细胞核蛋白和胞浆蛋白制备试剂盒
本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取核蛋白或胞质蛋白，提取制备过程简便。制备的核蛋白和胞浆蛋白能保持天然活性，并且纯度较高。提取的蛋白特别适于转录因子活性分析、凝胶阻滞实验（gel shift assay, EMSA）、免疫共沉淀、酶活性测定，也适于 Western Blot 实验。

所有产品仅供科研使用，不能用于食用和医疗等

细胞核蛋白和胞浆蛋白制备试剂盒

操作步骤：

1. 裂解：(1) 培养细胞，PBS洗涤细胞两次，根据细胞计数，或者估计离心后的细胞体积PCV。每1 ×10⁶个细胞加入50~100ul的CEB-A，刮下细胞转移至预冷的1.5ml离心管；或者每体积PCV细胞加入5倍PCV体积的CEB-A (即10~20 ml PCV的细胞加50~100ul的CEB-A)，剧烈振荡重悬。

裂解: (2) 组织样本，精确称重后剪成小块，PBS洗涤。通常每10 mg动物组织相当于1×10⁶个细胞，需加入50~100ulCEB-A，参照上表按比例加入。在冰上使用玻璃匀浆器匀浆组织，通常需要20~40次上下抽动匀浆，弃去筋膜组织。切记勿用高速电动匀浆器或超声破碎组织避免破坏细胞器结构。

2.  裂解产物转移至预冷的1.5ml离心管，剧烈振荡30秒，冰浴10~15min，期间每5分钟振荡15秒。

3. 可选步骤：根据步骤2裂解物体积，加入1/20体积的CEB-B，振荡10秒，冰浴1min (加入CEB-B可去除部分核膜蛋白，适于制备高纯度的核蛋白用于EMSA凝胶阻滞实验等，但可使胞浆蛋白出现很少量的膜蛋白污染。若制备高纯度胞浆蛋白可跳过此步骤。若制备核蛋白仅用于普通的Western Blot目的，则无须高纯度核蛋白，也可省略此步骤。

4.  胞浆蛋白组分的制备：将步骤2或步骤3的上清，12000g 4 ^oC离心5min，勿触动沉淀，将上清转移到新管，此即胞浆蛋白组分，可立即使用或−20~−70ºC保存。

5. 胞核粗提组分的制备：取第步骤4的原离心管，12000g 4 ^oC瞬时离心，尽量吸除上清，保留沉淀。加入100μl CEB-A和5μl  CEB-B，振荡10秒，重悬沉淀，冰浴1min，1000g 5min，弃上清。再次加入100μl CEB-A和5 μl CEB-B重悬沉淀冰浴1min，1000g 5min，尽弃上清，保留沉淀。

6.   胞核蛋白的制备：加50~100μl预冷NEB重悬步骤5的离心沉淀，剧烈振荡15秒，冰上30min，期间每10 min振荡15秒。12000g 5min，上清液含核蛋白成分，其中含有25%的甘油；可立即使用或−20~−70ºC保存。

细胞核蛋白和胞浆蛋白制备试剂盒