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细胞核-胞浆蛋白-胞膜制备试剂盒

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细胞核-胞浆蛋白-胞膜制备试剂盒
本试剂盒能够从哺乳动物新鲜或冻存的组织块、贴壁或悬浮细胞中制备细胞核、细胞膜与胞内质膜、细胞浆等三种主要亚细胞组分。其独特的试剂成分与优化的制备方案使细胞核-胞浆-胞膜制备过程简单易行,无需特殊设备和超速离心,可在1小时内完成。

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细胞核-胞浆蛋白-胞膜制备试剂盒

本试剂盒能够从哺乳动物新鲜或冻存的组织块、贴壁或悬浮细胞中制备细胞核、细胞膜与胞内质膜、细胞浆等三种主要亚细胞组分。其独特的试剂成分与优化的制备方案使细胞核-胞浆-胞膜制备过程简单易行,无需特殊设备和超速离心,可在1小时内完成。应用本试剂盒制备的胞膜是细胞膜和细胞器膜如线粒体、内质网及质膜的混合物;得到的细胞核是完整的未裂解细胞核,胞浆组分为可溶性胞浆蛋白。制备得到的产物纯度可胜任后续的免疫沉淀、蛋白印迹、2-D gel、酶活性检测和受体分析等实验。

操作步骤:

    1、 样本预处理

2、  组织细胞匀浆裂解

3、 粗提物制备

4、 胞膜胞浆制备

5、 细胞核制备:

 

说明:

1.  Suspension Buffer 不含去垢剂,重悬于Suspension Buffer 中的胞膜或胞核组分呈不溶解状态是正常的,用户可用自备溶液重悬胞膜或胞核成分。如果进行蛋白印迹、2-D get等实验,用户可用SDS上样缓冲直接裂解细胞膜或细胞核成分。对于进行免疫共沉淀实验来说,可用RIPA裂解液(C1053)重悬胞膜或胞核组分。

2.  胞浆组分可直接进行蛋白定量。胞核组分如需定量可加入TritonX-100至终浓度1%或SDS至终浓度0.5%用BCA法蛋白定量。

3.  用SDS-PAGE Loading 缓冲液裂解细胞核后,DNA释放会使核裂解物十分粘稠,可95oC加热5分钟,高速震荡打断DNA,重复加热2-3次。

4.  如果进行凝胶阻滞(EMSA)实验,建议使用普利莱P1200产品,该试剂盒可直接提取可溶性核蛋白.

5. 试剂盒各组分中未添加蛋白酶抑制剂,用户可自行选择添加,通常4oC快速操作不加蛋白酶抑制剂不会出现问题。

6.  沉淀胞浆蛋白方法:估算胞浆蛋白组分的体积,加入1/3体积30%三氯醋酸水溶液,-20 oC沉淀1小时或过夜。5,000g, 4 oC离心10分钟,弃上清,空气略干沉淀。用1xSDS上样缓冲液溶解沉淀,95oC加热5分钟,上样电泳。

 细胞核-胞浆蛋白-胞膜制备试剂盒

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