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TRIzol(总RNA提取试剂)
Trizol的颜色和TRIzol相同,加入氯反后上层呈无色,下层呈紫红色,便于吸取上层水相。
Trizol对动植物细胞或组织及细菌的总RNA抽提均适用。
Trizol可以抽提长达15 kb的RNA,也可以抽提microRNA等小RNA。抽提小RNA时宜-70℃沉淀过夜。
Trizol抽提所得RNA无DNA和蛋白污染。一般所得RNA溶于DEPC水后的A260/280值为1.8-2.0。
裂解细胞或和组织共匀浆时,Trizol可以保持样品中RNA的完整性,即可以有效抑制RNA的降解。
每一百万细胞用Trizol抽提可得5-15μg RNA;每毫克组织用Trizol抽提可得1-10μg RNA。产量因细胞和组织不同而异。
抽提两个样品约需一小时。
Trizol抽提所得RNA可直接用于Northern,点杂交,纯化mRNA,体外翻译,RNase protection assay,cDNA克隆,以及RT-PCR;也可以用于基因表达芯片分析、高通量测序(deep sequencing)等对RNA质量要求较高的情况。
使用冻存的细胞或组织抽提总RNA的效果通常比新鲜的细胞或组织差一些。因为在细胞或组织冻融过程中一些细胞或组织内的RNase会被释放出来并剪切样品。如果不能及时抽提RNA,先加入适量Trizol,并裂解样品后冻存。
必须戴一次性手套操作,且尽量不要对着RNA样品呼气或说话,以防RNA酶污染。建议戴一次性kou zhao操作。
TRIzol(总RNA提取试剂)