蛋白A琼脂糖凝胶
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蛋白A琼脂糖凝胶英文名称:Protein A Berpharose FF货号:B2832规格:1ml本产品仅供科研实验用,不做其它用途!
蛋白A琼脂糖凝胶
英文名称:Protein A Berpharose FF
货号:B2832
规格:1ml
1.产品介绍
Protein A Berpharose FF亲和介质以自制的琼脂糖凝胶为基质,以重组蛋白A(rProtein A)为配基,具有很高的物理化学稳定性,配基不易脱落,寿命长,使用方便,应用广泛。蛋白A(Protein A)能特异性地与抗体IgG分子的Fc区结合,所以Protein A亲和介质可用于抗体(单抗和多抗)的分离纯化,经过一步亲和层析,即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体。
2.规格
1ml(预装柱)、5ml(预装柱)、10ml(预装柱)、25ml、100ml、500ml、1L 纯化流程
应用举例:
结合缓冲液:20 mM磷酸缓冲液,150 mM NaCl,pH 7.0
洗脱缓冲液:0.1M甘-氨酸,PH3.0或0.1M柠檬酸缓冲液,pH 4.0
中和缓冲液:1 M Tris-HCl,pH 8.5
1) 1 ml重组蛋白A琼脂糖凝胶预填柱用5-10个柱床体积的蒸馏水洗去保存液。
2)用结合缓冲液结合缓冲液平衡5-10个柱床体积。
3)将5 ml人多抗血清用结合缓冲液稀释到50ml,0.45μm滤膜过滤上样。
4)用结合缓冲液再洗5-10个柱床体积。
5)用洗脱缓冲液洗脱抗体,收集洗脱峰,并用中和缓冲液调节其pH至中性。
6)每次使用后依次使用3个柱体积的结合缓冲液,5个柱体积的去离子水,5个柱体积的20%的乙醇平衡保存,防止填料被细菌污染。
7) SDS-PAGE电泳分析。
6.注意事项:
1)样品洗脱后一般pH很低,应立刻用碱性中和缓冲液(如1MTris-HCl,pH8.5)将收集到的抗体溶液中和到中性,或在收集容器中事先装5-10%、pH7.5的缓冲液(如1MTris-HCl或1M磷酸缓冲液),以利于维持抗体的生物活性,避免抗体失活。
2)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致,避免柱床内产生气泡,影响纯化效果。
3)填料再生清洗:随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量下降,严重影响纯化效果,这时需要对填料进行再生清洗(如下步骤)
去除沉淀或变性物质:用2倍柱体积的6M盐酸胍溶液进行清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS, pH 7.4清洗。
去除疏水性吸附造成的非特异性吸附物质:用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% Triton™X-100清洗,然后然后立即用5倍柱体积的PBS, pH 7.4清洗
4)本产品保存条件:20%乙醇,4~8℃。