辅酶 I NAD(H)测定试剂盒 生化试剂

辅酶 I NAD(H)测定试剂盒

（分光光度法，50T/24 样）

一、 测定意义：

辅酶 I NAD(H) 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞

中，NAD + 是糖酵解（EMP）和三羧酸循环（TCA）的主要

氢受体，生成的 NADH 经电子传递链（又称呼吸链，ETC）

传递把电子交给氧，在合成 ATP 的同时，形成大量的活性

氧（ROS），同时 NADH 再生为 NAD +。糖、脂、蛋白质三

大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完

成。NAD(H)含量及 NADH/NAD +比值的高低可用于评价糖酵

解和 TCA 循环的强弱。较高的 NAD(H)及 NADH/NAD +比值说

明细胞呼吸耗氧量较高，处于过氧化状态。此外 NADH/NAD +

比值升高液可抑制糖酵解和 TCA 循环。另外，NAD +降解产

物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作

用。

二、 测定原理：

分别用酸性和碱性提取液提取样品中 NAD + 和 NADH，NADH

通过 PMS 的递氢作用，还原氧化型噻唑蓝（MTT）为甲䐶

（Formazan），在 570nm 下检测吸光值；而 NAD + 可被乙

醇脱氢酶还原为 NADH，进一步采用 MTT 还原法检测。

三、 需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、移液器、1mL 比色皿、研

钵、冰和蒸馏水

五、 NAD + 和 NADH 提取：

1. 血清（浆）中 NAD + 和 NADH 的提取

NAD + 的提取：按照血清（浆）体积（mL）：酸性提取液体

积（mL）为1：5-10 的比例（建议取约0.1mL 血清（浆），

加入1mL 酸性提取液），煮沸5min（盖紧，以防止水分散失）；

冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取上清液至另一新

的离心管中，加入等体积的碱性提取液使之中和，混匀，

10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。

NADH 的提取：按照血清（浆）体积（mL）：碱性提取液体

积（mL）为1：5-10 的比例（建议取约0.1mL 血清（浆），

加入1mL 碱性提取液），煮沸5min（盖紧，以防止水分散失）；

冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取上清液至另一新

的离心管中，加入等体积的酸性提取液使之中和，混匀，

10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2.

组织中 NAD + 和 NADH 的提取

NAD + 的提取：按照组织质量（g）：酸性提取液体积（mL）

为1：5-10 的比例（建议取约0.1g组织，加入1mL 酸性提取

液），冰浴研磨，煮沸5min（盖紧，以防止水分散失）；冰

浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取上清液至另一新的

离心管中，加入等体积的碱性提取液使之中和，混匀，

10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。

NADH 的提取：按照组织质量（g）：碱性提取液体积（mL）

为1：5-10 的比例（建议取约0.1g组织，加入1mL 碱性提取

液），冰浴研磨，煮沸5min（盖紧，以防止水分散失）；冰

浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取上清液至另一新的

离心管中，加入等体积的酸性提取液使之中和，混匀，

10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。

3.

细胞或细菌中 NAD + 和 NADH 的提取

NAD + 的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按

照细菌或细胞数量（10 4 个）：酸性提取液体积（mL）为

500-1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 酸

性提取液），超声波破碎1min（冰浴，强度20％或200W，

超声2s，停1s），煮沸5min（盖紧，以防止水分散失）；冰

浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取上清液至另一新的

离心管中，加入等体积的碱性提取液使之中和，混匀，

10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。

NADH 的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，

按照细菌或细胞数量（10 4 个）：碱性提取液体积（mL）为

500-1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 碱

性提取液），超声波破碎1min（冰浴，强度20％或200W，

超声2s，停1s），煮沸5min（盖紧，以防止水分散失）；冰

浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取上清液至另一新的

离心管中，加入等体积的酸性提取液使之中和，混匀，

10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。

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