羟自由基(OH.-)测定试剂盒 生化试剂

羟自由基(OH.-)测定试剂盒

（比色法）

一、测定原理：

Fenton 反应是最常见的产生羟自由基的化学反应，

H2O2 的量和 Fenton 反应产生的 OH·量成正比，当给予电子

受体后，用griess试剂显色，形成红色物质，其呈色与OH·的

多少成正比关系。

二、试剂组成与配制：(50 管/48 样)

试剂一：3%H2O2标准品贮备液 0.5mL×1 支，4℃保存 3 个

月。0.03％标准品应用液的配制：3%H2O2 标准贮

备液∶双蒸水＝1∶99 稀释，现用现配。

试剂二：底物贮备液 1mL×1 支，4℃保存 3 个月。

底物应用液的配制：

①、若您的样本为抑制羟自由基，即测定管吸光度比

对照管吸光度低，则底物应用液的配制：底物

贮备液∶双蒸水＝1∶99 稀释，现用现配。

②、若您的样本为产生羟自由基，即测定管吸光度比

对照管吸光度高，则底物应用液的配制：底物贮

备液∶双蒸水＝1∶299 稀释，现用现配。

试剂三：甲液贮备液 2mL×1 支，4℃保存 3 个月，用时加

双蒸水 1∶9 稀释成应用液。乙液 7mL×2 支，4℃

保存 3 个月。试剂三应用液的配制：甲液应用液

与乙液等比例混合，用多少配多少，余下 4℃保

存。

试剂四：液体 10mL×1 瓶，4℃保存 3 个月。用时加双蒸

水稀释至 100mL，制备成应．用．液．，4℃保存。若

有结晶，则放置 37℃水浴至全部溶解后再稀释。

试剂五：液体 30mL×1 瓶，避光 4℃冰箱保存 3 个月。

试剂六：液体 30mL×1 瓶，避光 4℃冰箱保存 3 个月。

试剂七：分析纯的冰乙酸（冰醋酸）自备。

显色剂的配制：试．剂．四．应．用．液．∶试剂五∶试剂六∶冰乙酸

＝8∶3∶3∶2，现用现配。

[注]：抑制羟自由基的物质如：血清（浆）、各种组织匀浆液、

口服液等；产生羟自由基的物质如：中性白细胞、某

些药物、部分植物等。

五、注意点：

1、每一只管子反应时间一分钟（从加入试剂三到加入显

色剂的时间）一定要准确。

2、必须严格按照操作表顺序加试剂，不可配制混合试剂。

3、检测样本溶剂或介质可为生理盐水、双蒸水、醋酸，

但不能为磷酸缓冲液、无水乙醇。

4、此法检测灵敏度较高，检测血清（浆）和组织以外样

本时，最好先取原液及不同浓度稀释后的样本,例如 5

倍稀释液或 10 倍稀释液做预试。如测定管颜色太浅可

将样本用其溶剂继续稀释至颜色较深为止。我所曾检

测花粉的水提液的羟自由基，将其原液稀释 150 倍后，

显色较好。

附录Ⅰ：羟 自 由 基 最 佳 取 样 浓 度 摸 索

一、样本前处理：

1、血清（浆）：用生理盐水将血清（浆）按 1︰1、1︰4、1

︰9、1︰19 等稀释成一系列不同浓度的血清

（浆），分别取不同浓度的血清（浆）0.2mL 按血

清（浆）的测定操作表进行检测。

2、组织匀浆、细胞、线粒体或细胞膜等组织：分别用生理

盐水将组织匀浆液稀释成 10%、5%、2%、1%、

0.5%、0.1%等一系列不同浓度的组织匀浆，分别

取不同浓度的组织匀浆 0.2mL 按组织的测定操作

表进行检测。

二、操作步骤（以血浆样本为例作最佳取样浓度摸索）：

1、样本来源：正常组大鼠眼眶取全血，肝素抗凝取血浆进

行测定。

2、样本稀释：用生理盐水将血浆按 1︰1、1︰4、1︰9、1

︰19、1︰49、1︰99 稀释成一系列不同浓度

的血浆，分别取不同浓度的血浆 0.2mL 按血

清（浆）的测定操作表进行检测。

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