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2018-04-10谷-胱甘肽(GSH)测定试剂盒
(比色法)
一、测定原理:
二硫代二硝基苯甲酸与巯基化合物反应时能产生一种黄色化合物,可进行比色定量测定。
二、试剂组成与配制:(100T/96 样)
试剂一:甲粉×1 瓶,乙液 50ml×1 瓶,4℃保存 6 个月。甲粉:加 90~100℃的热双蒸水 170ml,
充分溶解;
试剂一应用液的配制:将已配好的甲液与乙液充分混合。此为过饱和溶液,室温静置冷却后,如
有结晶,则取上清进行实验,室温保存 6 个月。
试剂二:粉剂×1 瓶,用时加双蒸水至 200ml 溶解,用我所赠送的塑料瓶室温保存 6 个月。
试剂三:粉剂×1 支,用时加双蒸水至 50ml 溶解,避光 4℃保存 6 个月。
试剂四:粉剂×4 支,用时每支加双蒸水 10ml 溶解,避光冷藏可保存 5 天。
试剂五:GSH 标准品粉剂 3.07mg×3 支,4℃保存 6 个月。
试剂六:GSH 标准品溶剂贮备液 10ml×1 瓶,4℃保存 6 个月。
GSH 标准品溶剂应用液的配制:按 GSH 标准品溶剂贮备液:双蒸水=1:9,加入 9 倍体积的双
蒸水进行稀释,现用现配。
1mmol/L GSH 标准品溶液的配制:GSH 的分子量为 307,每次测定前将 3.07mg 的 GSH 标
准品加入到 10ml 的 GSH 标准品溶剂应用液中,混匀,
现用现配。
20μmol/L GSH 标准品溶液的配制:取 1mmol/LGSH 标准品溶液 0.2ml 加入 GSH 标准品溶
剂应用液 9.8ml, 现用现配。
四、注意事项:
1、血液中的 GSH 几乎全部存在于红细胞内,可以用每升全血中 GSH 的克数来表示,也可用
每克 Hb 中 GSH 的含量来表示。
2、计算时应用消光系数,故比色计要校正波长。用标准管计算较方便、准确。
3、吸取上清时,用带刻度的 5ml 滴管,或者用移液器,避开表面的一层薄膜,插到上清
液中吸取 2ml 做显色反应。
4、每批试验做 2 个标准管、空白管,以减少操作误差。
五、测定意义:
谷-胱甘肽(GSH)是一种低分子清除剂,它可清除 O2 -、H2O2、LOOH。谷-胱甘肽是谷
氨酸、甘-氨酸和半胱-氨酸组成的一种三肽,是组织中主要的非蛋白质的巯基化合物,并且是
GSH—PX 和 GST 两种酶类的底物,为这二种酶分解氢过氧化物所必需,它并且能稳定含巯
基的酶和防止血红蛋白及其它辅因子受氧化损伤,最近还证明 GSH 也参与使维生素 E 恢复
到还原态的作用,缺乏或耗竭 GSH 会促使许多化学物质或环境因素产生中毒作用或加重其
中毒作用,这可能与增加氧化损伤有关,因而 GSH 的量的多少是衡量机体抗氧化能力大小
的重要因素。
谷-胱甘肽(GSH)测定试剂盒